3.1Cas12a/crRNA RNP的基因组编辑功效 为了评估RNP方法的无转基因柑橘基因组编辑效果,我们首先使用CsPDS基因作为靶标,因为其明显的白化表型加快了双等位基因/纯合突变的鉴定。Cas9和Cas12a均用RNP方法的基因组编辑。 我们选择了Cas12a,因为它比Cas9产生更长的缺失。我们在RNP介导的胚性柑橘原生质体基因组编辑中评估了...
在本研究中,作者开发的SCas12a系统将crRNA拆分为scaffold RNA和spacer RNA,将二者与Cas12a在体外以2:2:1的摩尔比混合,分别评估顺式切割活性和反式切割活性,发现与野生型Cas12a RNP活性相似。作者利用该系统检测miRNA,将spacer RNA设计为待测miRNA序列,加入ssDNA作为激活剂引发反式切割,消除了额外的逆转录和预扩增的...
目前已发现的Cas酶亚型共计33个,分为2个大类、6个不同类型。今天小编带来的是近几年研究正热的Cas12a蛋白的相关应用,目前Cas12a(Cpf1)与crRNA形成的核糖核蛋白(RNP)直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快、脱靶效应更低、编辑效率更高等优点。 图1. 两类CRISPR/Cas系统,图片来源Makarova KS et al, 2020 ...
Cas12b是一个可根据crRNA指导进行DNA切割的RNP复合体。在靶DNA的指导下,其核酸酶域会被激活并进行DNA内切,实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具,crRNA的设计决定了其特异性。但是其附带切割效应也使非专属性信号放大成为可能,这需要在应用中加以考量。 Cas12b与Cas12a是两种不同的DNA内...
However, RNP-mediated genome editing efficacy is low42. In this work, we generate transgene-free canker-resistant C. sinensis cv. Hamlin (a widely planted citrus cultivar) lines using LbCas12a/crRNA RNP within 10 months (Fig. 1). Off-target mutations are not detected in the edited lines....
1a, which includes a 40-nt intact crRNA, this deficient Cas12a RNP did not exhibit any nuclease activity, possibly due to the lack of spacer RNA. Recently, this “Cas12a-scaffold RNA” complex has also been reported by other researchers21,22. For instance, Shebanova et al.22. demonstrated...
虽然作为 RNP 的一部分以电穿孔法导入 Cas12a 核酸内切酶是***方法,但 Alt-R CRISPR-Cas12a crRNA 也与所有来源的A.s.或L.b.Cas12a 兼容,包括稳定表达A.s.Cas12a 核酸内切酶的细胞。
CRISPR-Cas9系统包括一个gRNA(或sgRNA) 和 Cas9 核酸酶,它们共同形成一个核糖核蛋白(RNP)复合物。Cas9 蛋白识别的 PAM 序列是 5'-NGG-3',其中 N 代表任意核苷酸。如果 PAM 序列匹配正确,并且 gRNA 成功地与目标位点结合,那么 Cas9 会在 PAM 序列上游约 3-4 个核苷酸进行 DNA 双链的切割。
目前已发现的Cas酶亚型共计33个,分为2个大类、6个不同类型。今天小编带来的是近几年研究正热的Cas12a蛋白的相关应用,目前Cas12a(Cpf1)与crRNA形成的核糖核蛋白(RNP)直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快、脱靶效应更低、编辑效率更高等优点。 图1. 两类CRISPR/Cas系统,图片来源Makarova KS et al, 2020...
CRISPR-Cas9系统包括一个gRNA(或sgRNA) 和 Cas9 核酸酶,它们共同形成一个核糖核蛋白(RNP)复合物。Cas9 蛋白识别的 PAM 序列是 5'-NGG-3',其中 N 代表任意核苷酸。如果 PAM 序列匹配正确,并且 gRNA 成功地与目标位点结合,那么 Cas9 会在 PAM 序列上游约 3-4 个核苷酸进行 DNA 双链的切割。