cas12a是一种高效、准确的基因编辑工具,其工作原理是在细菌噬菌体CRISPR-Cas系统中,利用Cas12a酶切割靶标DNA序列。在切割过程中,crRNA作为“寻位灯塔”,指引Cas12a酶锁定靶标位置,并与靶标DNA序列形成互补配对,进而被酶识别切割。二、crRNA的结构设计crRNA的设计是cas12a基因编辑过程中的重要一环。它由人工合成或细胞...
cas12a可用于DNA的高灵敏度检测、基因编辑、转基因等应用。crRNA设计决定了其靶向性，继而影响其应用效果。但非特异性切割也需要在应用设计中加以控制。Cas12a切割机理如下:1. cas12a是一个多功能蛋白，含有双链DNA结合域和核酸酶域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以非特异性切割DNA。2. crRNA是处理过的RNA分子...
因为在一步法CRISPR检测中，Cas12a的等温扩增和切割反应同时发生在一管中，使用CRISPR RNA（crRNAs）靶向次优PAMs而不是典型PAMs可以将反应速度加快2-3倍。此外，广泛的测试表明，sPAMC比使用典型PAMs的一管法测试显示出更高的灵敏度和可靠性。二．设计Cas12a-crRNA引物中次优PAM应如何选择?次优PAM是相对于经典PAM...
一．设计Cas12a-crRNA引物的关键因素：PAM对于crRNA引物和靶标序列的识别非常重要，因为Cas12a蛋白识别dsDN...
Cas12a 的引导 RNA（crRNA）同样别具一格。它结构精简，仅需约 42 nt 的 crRNA 便能独当一面，完全摆脱了 Cas9 所需的 tracrRNA 的依赖，大大简化了 RNA 设计流程，为实验操作带来极大便利。而且，这种 crRNA 可直接从前体 crRNA 加工生成，在多重基因编辑场景中表现得游刃有余，科研人员能够借此灵活操控多个...
1类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌当中最为常见,所占比例在所有已鉴定CRISPR-Cas基因座中高达90%。2类CRISPR-Cas系统包括剩余的10%几乎只存在于细菌中,并组装成一个核糖-核蛋白复合物,由crRNA与Cas蛋白组成,crRNA包含靶向特定DNA序列的信息。 目前所流行的Cas9与...
一.设计Cas12a-crRNA引物的关键因素: PAM对于crRNA引物和靶标序列的识别非常重要,因为Cas12a蛋白识别dsDNA靶标始于PAM序列的识别,从而促进dsDNA靶标的展开,PAM序列是TTTV序列,位于crRNA序列的5’端。对于许多初次接触CRISPR技术的小白很多可能不太了解PAM以及其作用是什么,而PAM基序对于CRISPR/Cas检测至关重要,本文主要...
艾迪基因专注于发展和优化基于CRISPR/Cas的基因组编辑技术，技术团队通过自主开发的Fish-bait纯化工艺，获得了性能更好的Cas12和Cas13基因编辑蛋白，并开发了特有的crRNA设计逻辑。由此建立了FASST检测技术，大大提高了Cas酶切割活性和CRISPR检测的灵敏度。酶活性对比图 LbCas12a活性对比测试 LwaCas13a活性对比测试 ...
crRNA的设计是CRISPR检测技术的关键步骤之一。对于初次接触该实验的童鞋，对于crRNA的设计有诸多疑问。其实...