4. 引物设计（PCR）（可选）①Product size（扩增产物大小）②Primer size（引物长度）③Primer Tm （引物退火温度）④Minimum distance from primer to target site（引物到crRNA target位置的最小距离）5. crRNA的选择和合成 ①选择Efficiency分数较高的几条
Guide sequence 习惯用ATGC，是为了便于和target DNA序列比对。合成RNA时，默认U.如果对于crRNA的设计仍然...
首先，靶标核酸经等温（RPA或LAMP）或变温（PCR）方法扩增富集；然后，扩增产物与Cas12-crRNA结合，激活Cas12的附属切割功能，对ssDNA荧光探针进行切割，释放荧光基团，形成检测信号。使用CRISPR/Cas12a编辑基因成败的关键就在于crRNA。上海惠诚生物（13917250134（同微信）QQ：1715451510）提供Cas12a crRNA设计合成与纯化。
一．设计Cas12a-crRNA引物的关键因素：PAM对于crRNA引物和靶标序列的识别非常重要，因为Cas12a蛋白识别dsDNA靶标始于PAM序列的识别，从而促进dsDNA靶标的展开，PAM序列是TTTV序列，位于crRNA序列的5’端。对于许多初次接触CRISPR技术的小白很多可能不太了解PAM以及其作用是什么，而PAM基序对于CRISPR/Cas检测至关重要，本文...
crRNA的设计是cas12a基因编辑过程中的重要一环。它由人工合成或细胞中的sgRNA生成,长度通常在70-90个核苷酸之间。理想的crRNA结构应具备序列保守性、稳定性及与靶标DNA序列的有效匹配性。通常,我们会将特定数量的尿嘧啶(U)或腺嘌呤(A)放在crRNA的前端,用于与靶标序列的启动区域进行配对。三、crRNA的长度设计crRNA的...
一．设计Cas12a-crRNA引物的关键因素：PAM对于crRNA引物和靶标序列的识别非常重要，因为Cas12a蛋白识别dsDN...
设计高效的Cas12acrRNA引物，关键在于以下几点：1. 选择合适的PAM序列： 经典PAM与次优PAM：PAM序列位于crRNA序列的5’端，是Cas12a蛋白识别dsDNA靶标的起始点。经典的PAM序列是TTTV，但次优PAM序列在某些情况下可能表现更佳。 次优PAM的优势：使用次优PAM可以减慢Cas酶对靶标的识别速度，从而减缓切割...
Cas12a 的引导 RNA（crRNA）同样别具一格。它结构精简，仅需约 42 nt 的 crRNA 便能独当一面，完全摆脱了 Cas9 所需的 tracrRNA 的依赖，大大简化了 RNA 设计流程，为实验操作带来极大便利。而且，这种 crRNA 可直接从前体 crRNA 加工生成，在多重基因编辑场景中表现得游刃有余，科研人员能够借此灵活操控多个...