效应复合物首先扫描5'-TTN-3'PAM位点,之后通过碱基互补配对原则使crRNA间隔序列与目标DNA同源序列结合,将Cas12a特定靶向结合到目标位点。Cas12a使用RuvC核酸内切酶结构域对DNA实现远离PAM交错切割,同时将PAM远端切割产物释放,产生长度为4~5nt突出的黏性末端缺口。随后,细胞启动修复机制以修复损伤缺口。NHEJ和HDR是真核细...
长度范围:40–49 nt 纯化方式:脱盐或HPLC纯化 (HPLC纯化可保证纯度≥90%) 修饰类型:默认无修饰,可定制化修饰 交付规格:2-5000nmol,冻干粉 生产周期:4个工作日起 金斯瑞Cas12a crRNA已服务于国内外多家基因与细胞治疗、模式动物构建、体外诊断等方向的客户,优越的质量和稳定的交付获得客户的认可与好评。 金斯瑞Cas...
crRNA的长度直接影响其与靶标DNA序列的匹配效率。一般来说,较长的crRNA具有更高的稳定性,但同时也会降低其与靶标DNA序列的匹配效率。因此,我们需要在长度和匹配效率之间找到一个平衡点。通常情况下,我们建议使用65-75个核苷酸长度的crRNA。四、crRNA的序列设计crRNA的序列设计主要考虑的是与靶标DNA序列的互补程度。目...
(c)从溶液中miRNA激活的crRNA-Cas12a RNP对不同长度DNA报告基因的反式切割中观察到的反应速度。crRNA-Cas12a RNP的浓度为2 nM,靶miRNA的浓度为40 nM。当使用30 nt FQ reporter作为底物时,米氏常数(KM)测定为3.5 × 10- 8 M,切割速率(Kcat / KM)为2.8 × 106 M-1 s-1。当使用8 nt的报告基因作为底物...
(图2a),且删除编辑事件为6bp-12bp的删除(图2b-2d),删除位置在PAM远端13到27nt(图2e-2g);2)使用存在碱基错配的spacer时,3种Cas12a除对PAM远端3bp的错配表现一定容错外,均体现了明确的高特异性(图2h-2k);3)HkCas12a和Mb3Cas12a在crRNA长度为19到23nt时可以产生有效编辑,而PrCas12a需要更长的spacer来...
crRNA 是 Cas12acrrna 的重要组成部分,其长度通常在 20-30 个核苷酸之间。crRNA 通过碱基互补配对与目标 DNA 序列结合,引导 Cas12a 蛋白精确切割所需的 DNA 片段。crRNA 的 3"端含有特定的序列,可以与Cas12a 蛋白的 RBD 结构域相互作用,从而使 Cas12a 蛋白能够识别并结合 crRNA。 Cas12acrrna 的工作原理类似于...
目前所流行的Cas9与Cas12a系统均属于2类,CRISPR-Cas12a为一种由crRNA所引导的内切酶,是一种RNA引导的系统,被归类为Ⅴ型。CRISPR-Cas12a系统在病原体检测中的应用包括两个阶段:1.检测样本的核酸扩增和构建;2.反应和CRISPR系统的演示。采用PCR、等温扩增等低成本...
首先,为测试Cas12a可识别的最小靶标长度,作者设计了不同长度的ssDNA靶标,结果表明,14nt是激活Cas12a反式切割活性的必需条件(图1 a-d)。其次,作者通过同时添加2个split ssDNA,它们分别与PAM近端(Pp)种子区和PAM远端(Pd)区的crRNA互补,发现当split ssDNA的组合长度大于或等于20 nt时,可以激活Cas12a的反式切割...
一、Cas12a在切割过程中的结构 为了捕获R-loop形成过程中 WT Cas12a 的各种中间体，研究人员将WT Cas12a 和与crRNA具有不同互补序列长度的靶标DNA 底物一起孵育并获取冷冻电镜图。从中，研究人员获得了六个不同的R-loop中间结构，标称分辨率范围为3.3至3.7 Å。冷冻电镜结果中WT Cas12a的这些结构描述了R-...