15.作为本发明的优选方式之一,所述cas12a裂解反应体系(25μl)如下:5μl neb 3.1缓冲液、3μl crrna(10μm)、1μl lbcas12a(40nm)、1μl异硫氰酸荧光素 ‑ 猝灭剂双标记探针(60nm)、3ul lamp扩增产物、ddh2o 12μl。 16.或者,所述cas12a裂解反应体系(25μl)如下:5μl neb 3.1缓冲液、3μlcrr...
1.本发明涉及生物检测技术领域,尤其涉及一种基于crispr-cas核酸检测技术,及其靶向结核分枝杆菌利福平耐药性基因rpob点突变的crrna设计合成及纯化。 背景技术: 2.结核病(tuberculosis,tb)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, mtb)感染机体所引起的重大传染性疾病。耐药性tb特别是多药耐药性tb的出现为tb的预防和治...
Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 是一种含有 40–44个碱基的单链引导 RNA,包含 20个 碱基的恒定区(环状结构域)和 20–24个 碱基的目标特异性区域(前间隔序列结构域)。我们通常推荐使用 21个碱基的前间隔序列结构域,以获得更优活性。所有 Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 都是通过专有化学修饰合成...
1. Reporter：Cas13a切割底物。可搭配我司的Reporter进行检测，或自行设计合成Reporter.名称Item货号 Cas13...
已有的机制研究指出,AcrIIC2和AcrIIA17能通过结合Cas9以抑制Cas9-crRNA复合物形成,因此研究者猜测AcrVIB1是否通过类似的机制抑制Cas13b功能。随后的微量热泳动(MST)和EMSA实验指出,AcrVIB1并不抑制Cas13b-crRNA复合物形成,反而有效促进了...
该研究发现Cas12c 是一种 RNA 引导的 DNA 结合酶,它不切割靶 DNA,而是通过 crRNA 介导的相互作用与靶 DNA 结合,并可以通过识别噬菌体必需基因来保护细菌免受噬菌体的感染。 Cas12c 可处理 pre-crRNA,但不切割 DNA 为了确认 Cas12c 是否具有发挥免疫保护功能的一系列酶活性,他们首先重组了 Cas12c 并对其进行了...
crRNA/gRNA 与Cas12a结合,形成功能性复合物(functional complex),被目标序列特异性激活。目标序列一般是经过特异性扩增(PCR,RPA或LAMP均可)。 常用的Cas12a有AsCas12a (from Acidaminococcus) 和 LbaCas12a(from Lachnospiraceae). 根据文献报道,两者的crRNA结构序列稍有差异(如下)。 AsCas12a crRNA scaffold sequenc...
摘要:本发明公开了一种用于检测猴痘病毒的crRNA靶点及CRISPR‑Cas13a系统。所述CRISPR‑Cas13a系统包括Cas13a蛋白和crRNA,或二者形成的复合体;所述crRNA包括用于与Cas13a蛋白结合的锚定序列和靶向猴痘病毒靶点序列的向导序列;所述猴痘病毒靶点序列位于猴痘病毒基因组第46242‑46703位。通过实验证明:本发明的crRNA可...
1. cas12a是一个多功能蛋白,含有双链DNA结合域和核酸酶域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性,可以非特异性切割DNA。 2. crRNA是处理过的RNA分子,含有与靶DNA互补的序列,可以特异性识别靶DNA。多个crRNA可以成簇,以提高靶向效率。 3. 在不存在靶DNA的情况下,cas12a的核酸酶活性是抑制的。crRNA与cas12a结合后,也不...
CRISPR系统是细菌和古细菌适应性免疫的一部分，由crRNA引导的Cas核酸酶可以被编辑以识别所需的目的序列，从而进一步的进行基因编辑或核酸检测。目前有多种提高CRISPR系统检测能力的方法，比如：将RNA结合域融合到Cas13a活性位点、设计发夹报告器、整合单个核酸不同核苷酸区域的多个crRNA，以及crRNA工程化改造等。crRNA工程化...