1.2 CAR-T疗法的流程 利用白细胞分离术收集患者的T细胞,然后在体外进行T细胞活化,通过装备CAR基因的慢病毒载体,将CAR基因转入T细胞从而CAR-T细胞,CAR-T细胞经扩增纯化然后回输患者体内进行治疗。具体过程如下: ▲图4. CAR-T生产工艺流程 慢病毒载体是由三个包装质粒和一个表达质粒(也称穿梭质粒)瞬间共转染293T细胞,...
最后,为了进一步提高安全性,将表达CAR分子的目的基因、rev基因、gag和pol基因及VSV-G基因分别用4个质粒携带,慢病毒包装只需把上述4个质粒共同转染到293T细胞中,三个质粒分别表达病毒复制组装需要的元件,病毒就这样在293T细胞中包装出来了。 ▲图5. 慢病毒载体包装过程 慢病毒包装质粒的生产 常用的慢病毒包装质粒生...
此外,T 细胞必须严格从患者的血液中分离出来,因为在转导过程中残留的肿瘤细胞可能会导致 CD19-CAR 在制造过程中意外转移到白血病细胞中。这会导致 CAR-T 细胞抗性克隆的产生,其中 CD19 被 CAR 的单链可变抗体片段(scFv)掩盖,从而无法被正确识别。患者...
此外,T 细胞必须严格从患者的血液中分离出来,因为在转导过程中残留的肿瘤细胞可能会导致 CD19-CAR 在制造过程中意外转移到白血病细胞中。这会导致 CAR-T 细胞抗性克隆的产生,其中 CD19 被 CAR 的单链可变抗体片段 (scFv) 掩盖,从而无法被正确识别。患者会因此复发癌症或死亡。虽然到目前为止只报道了一例这样的病...
但是该系统在临床应用中存在T细胞表达外源基因所带来的免疫排斥问题。最近研究人员新开发的与synNotch原理类似的SNIPRs系统采用了全部人源化的基因回路,解决了免疫排斥问题,但是两个载体系统使得T细胞生产工艺更复杂,同时质粒拷贝数增加伴随着T细胞恶性转化风险。
图1可注射超分子水凝胶剂型设计实现CAR-T细胞原位持续改造,促进实体瘤免疫治疗的示意图(图片来源:Advanced Materials) 近期,厦门大学吴云龙教授、吴彩胜教授设计了一种可注射的携带CAR质粒的(CD3-PPP/pCAR@α-CD)超分子水凝胶体系用于实体瘤部位CAR-T细胞原位持续改造(图1)。
病毒基因的制造需要在cGMP的环境中包装293T细胞系。这是一个费力且昂贵的步骤,主要是因为载体需要在洁净室中包装,且载体需要额外的放行检测。慢病毒的制造主要通过瞬时转染大量的质粒DNA;因此它的成本比起通过稳定包装细胞系的逆转录病毒要贵。开发稳定的包装细胞系,...
▲图4. CAR-T生产工艺流程 慢病毒载体是由三个包装质粒和一个表达质粒(也称穿梭质粒)瞬间共转染293T细胞,通过克隆筛选获得稳定组装表达高滴度慢病毒载体的细胞株,经发酵纯化后获得一定质量要求的慢病毒。 2 慢病毒载体包装四质粒系统 2.1质粒系统 慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从...
最后，我们从病人体内分离出T细胞，将上一步构建的质粒转染至T细胞内，便可以得到能表达特异性受体的“升级版”T细胞。将它再输送回至患者体内，患者的免疫系统就可以特异性识别肿瘤并对其进行清除了。如何对CAR-T细胞的质量进行检验?输送回患者体内的T细胞是否确实拥有了特异识别肿瘤的能力？这是CAR-T疗法的关键所在。...
病毒基因的制造需要在cGMP的环境中包装293T细胞系。这是一个费力且昂贵的步骤,主要是因为载体需要在洁净室中包装,且载体需要额外的放行检测。慢病毒的制造主要通过瞬时转染大量的质粒DNA;因此它的成本比起通过稳定包装细胞系的逆转录病毒要贵。开发稳定的包装细胞系,例如WinPac,能够降低慢病毒载体的制造成本。而且,病毒...