AGE法能分离SC、OC及L构型,但只是一种半定量分析方法;离子交换法(如DNA-NPR)可以实现各种拓扑形态质粒的基线分离,洗脱顺序为开环、超螺旋、线性和质粒二聚体,可以分析质粒的含量和拓扑形态,检测质粒的纯度和浓度。质粒不同的拓扑结构也可用毛细管凝胶电泳(CGE)进行区分,在CGE检测中,不同构型的质粒可被填充凝胶的毛...
最后,为了进一步提高安全性,将表达CAR分子的目的基因、rev基因、gag和pol基因及VSV-G基因分别用4个质粒携带,慢病毒包装只需把上述4个质粒共同转染到293T细胞中,三个质粒分别表达病毒复制组装需要的元件,病毒就这样在293T细胞中包装出来了。 ▲图6. 慢病毒载体包装过程 3 慢病毒包装质粒的生产 常用的慢病毒包装质...
以基于慢病毒载体的CAR-T产品为例,其主要的制备过程可被分为三部分:慢病毒载体生产、T细胞分离及活化、CAR-T细胞生产。 慢病毒CAR T细胞制造工艺流程 1、慢病毒载体的生产 为了制造慢病毒载体,科研人员需要经过一系列精心设计的实验步骤。首先,准备工作的核心是三个包装质粒和一个表达质粒(也称为穿梭质粒),它们在生...
首先,准备工作的核心是三个包装质粒和一个表达质粒(也称为穿梭质粒),它们在生物学中扮演着至关重要的角色,携带了细胞生长和分裂的关键指令。 接下来,科研人员采用共转染技术,将这三个包装质粒和一个表达质粒瞬间导入到293T细胞中。这些293T细胞经过特殊培...
既然纳米颗粒制备CAR-T这个新方法疗效如此显著,流程又如此简介,那么,这个纳米颗粒又是怎么制作的呢? 纳米颗粒的结构(图9),其表面是一层结合CD3抗体的多聚谷氨酸(PGA),内部由表达CAR的质粒DNA和多聚物组成,PGA-anti-CD3包裹在DNA-多聚物表面。加CD3抗体是因为CD3是T细胞表面的广泛表达的标志物,因此结合CD3抗体可以...
过活化的 CAR-T 细胞可以通过 rimiducid 诱导的 MyD88 和 CD40 激活来消除。在该系统中,注射rimiducid诱导caspase-9依赖性CAR-T细胞凋亡,增强细胞增殖、细胞因子分泌和抗肿瘤功效[94]。另一种自杀基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV-TK),它被插入到 CD44 异构体变体 6...
图1:CAR结构发展过程 除了在胞内信号区增加共刺激信号分子来提高细胞活性以外,研究者也利用其他方法来巧妙地改造CAR,使改造后的 T细胞能在体内发挥*大的治疗效果。 与肿瘤细胞的斗争中,CAR-T的免疫攻击常常由于肿瘤产生的免疫抑制信号而削弱。这些信号包括抑制性细胞因子IL-4,IL-10和肿瘤生长因子 Beta(TGF-beta)等...
基于多年在肿瘤免疫领域的研究经验,赛业生物可为CAR-T/其它细胞治疗研究者提供专业的CAR分子设计及载体构建、CAR慢病毒制备、靶抗原稳转细胞株构建等服务。 ✔ 丰富的CAR分子设计经验,可提供专业的各种定制化的CAR分子设计服务 ✔ 丰富的CAR慢病毒质粒载体库,可提供快速优质的服务 ...
1、CAR-T的结构 CAR-T治疗又称嵌合抗原受体T细胞治疗,是将人的T细胞经过基因工程手段体外修饰改造后,从而可特异性识别和结合肿瘤细胞表面的抗原并实现对肿瘤细胞的特异性杀伤,将其回输患者体内,用于治疗疾病。 图1 CAR-T细胞治疗 (图1引自The application of CAR-T cell therapy in hematological malignancies: ad...
CAR-T 细胞源既可以是 CD4+ 也可以是 CD8+,两种细胞类型的比例为 1:1,可提供协同抗肿瘤作用。CAR-T 细胞可以来源于患者自身血液中的 T 细胞(自体),也可以来源于另一个健康供体的 T 细胞(异体)。 自体CAR-T 细胞是从患者血液中获取T 细胞,再通过带有对CAR 结构编码的质粒的病毒载体转染等方式,使得CAR-...