Bac-to-Bac系统是一种用于昆虫细胞中杆状病毒表达系统的转移载体。该系统由Invitrogen(现在是Thermo Fisher Scientific)公司开发,旨在实现在昆虫细胞中高效地表达外源基因。 Bac-to-Bac系统的转移载体主要包括两个部分:质粒DNA和负责转染的超低频(bacmid)。质粒DNA是...
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统促进了重组杆状病毒的快速有效产生。基于Luckow等人1993年开发的方法，Bac-to-Bac杆状病毒表达系统利用Tn7转座子的位点特异性转座特性来简化和增强产生重组bacmid DNA的过程。该系统的第一个主要组成部分是一个pFastBac载体，目的基因将被克隆到该载体中。根据所选的pFastBac载体，目的基因的表...
1)背景介绍 大肠杆菌表达系统是实验室进行蛋白纯化的基本系统,培养费用低,能高效地表达外源蛋白,缺点是不能进行蛋白表达后修饰。杆状病毒-昆虫细胞表达系统能利用昆虫细胞体系进行正确的蛋白后修饰,培养成本也较哺乳动物细胞低,杆状病毒启动子高效启动蛋白表达,并且能容下较大的外源基因组。 苜蓿银纹夜蛾多(核壳体)核型...
Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性:•节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体表达盒与 DH10Bac 大肠杆菌感受态细胞中的亲本杆状病毒...
Bac-to-Bac HBM TOPO 分泌表达系统可在蜂素(HBM)分泌信号作用下进行分泌蛋白的表达。该表达系统非常适用于毒性蛋白和糖蛋白(需要分泌信号以进行糖基化)的研究。另外,由杆状病毒分泌的糖蛋白可在体外轻松去糖基化,这一点在蛋白结晶中非常重要。其它优点还包括: ...
*一个Ecoli宿主,DH10Bac,包含杆状病毒质粒(杆粒)和辅助质粒,在转染pFastBac表达结构后可以产生重组杆粒。 *一个控制表达的质粒,包括Gus和/或CAT基因,以便在感染细胞后产生重组杆状病毒,表达β-葡萄糖酸酐酶和/或氯霉素乙酰转移酶。 Bac-to-Bac表达系统的优点: 使用这个系统产生重组杆状病毒较传统的同源重组有以下优...
内就能完成重组病毒的构建,取名为Bac-to-Bac表达系统,意即从细菌(bacterium) 到杆状病毒(baculovirus),革命性地改变了重组昆虫杆状病毒的构建方法。其基 本原理为:将一个改造后的AcNPV基因组转化入大肠杆菌,使它像普通质粒一样 能在细菌中复制(由于太大,只限单拷贝),将其称之为杆状病毒穿梭载体 ...
Bac-to-Bac 表达系统 I. pFastBac-X重组质粒的构建 利用分子生物学技术构建所需的pFastBac重组质粒,以DH5α为宿主,进行扩增.(以下以pFastBac-X为例进行说明. II. pFastBac-x重组质粒的转座步骤: 1.??制备LB琼脂平板。 LB培养液(含Agar):胰蛋白冻10g/l,Nacl 10g/l,酵母提取物 5g/l,Agar 15g/l 高压灭菌...
1.了解Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的原理和特点。 2.掌握昆虫Sf9细胞的培养方法。 3.掌握杆状病毒侵染昆虫细胞并表达蛋白的方法。 二、实验原理 杆状病毒表达系统是一种颇受欢迎的超量表达重组蛋白质的真核细胞表达系统。与细菌 表达系统不同,杆状病毒表达系统可以利用存在于高等真核生物中的多种蛋白质的修饰、加...
Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统主要包括: *pFastBac 捐献质粒的选择,它要能够产生包含目的位点的表达结构,这个目的基因的产生被杆状病毒特意位点启动子控制。 *一个 Ecoli 宿主,DH10Bac,包含杆状病毒质粒(杆粒)和辅助质粒,在转染 pFastBac 表达结构后可以产生重组杆粒。 *一个控制表达的质粒,包括 Gus 和/或 CAT ...