Bac-to-Bac表达系统的优势: 滴度可高至108pfu,可以进行大规模蛋白表达 pFastBac™ 载体含多角体启动子,可获得高得率的重组蛋白 可靠快速的TOPO 5分钟平末端克隆,节省时间 N端及C端添加的6xHis 标签可轻松进行纯化 含有TEV 蛋白酶位点可用于去除N端及C端的标签从而得到...
Bac-to-Bac HBM TOPO 分泌表达系统可在蜂素(HBM)分泌信号作用下进行分泌蛋白的表达。该表达系统非常适用于毒性蛋白和糖蛋白(需要分泌信号以进行糖基化)的研究。另外,由杆状病毒分泌的糖蛋白可在体外轻松去糖基化,这一点在蛋白结晶中非常重要。其它优点还包括: ...
Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性: •节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体...
利用 Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒时，首先将外源基因克隆到供体质粒pFastbac的多克隆位点上，然后用普通CaCl2法将供体质粒转化进含AcBac( bMON14272) 和辅助质粒pMON7124的大肠杆菌DH10Bac中，在辅助质粒提供的转座酶作用下，外源基因转座到AcBac多角体基因位点的LacZα片段上的mini att Tn7位点，通过蓝白斑筛选...
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统促进了重组杆状病毒的快速有效产生。基于Luckow等人1993年开发的方法,Bac-to-Bac杆状病毒表达系统利用Tn7转座子的位点特异性转座特性来简化和增强产生重组bacmid DNA的过程。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统促进了重组杆状病毒的快速有效产生。基于Luckow等人1993年开发的方法,Bac-to-Bac杆状病毒表...
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统主要包括: *pFastBac捐献质粒的选择,它要能够产生包含目的位点的表达结构,这个目的基因的产生被杆状病毒特意位点启动子控制。 *一个Ecoli宿主,DH10Bac,包含杆状病毒质粒(杆粒)和辅助质粒,在转染pFastBac表达结构后可以产生重组杆粒。 *一个控制表达的质粒,包括Gus和/或CAT基因,以便在感染...
内容提示: Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 试剂盒内容物: Introduction: : Overview: : Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统提供快速有效的方法产生重组杆状病毒。此方法基于让已经转入杆状病的质粒(杆粒)的位点特意转座子的表达框的质粒在 Ecoli 中扩增。Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统主要包括: *pFastBac 捐献质粒的选择,...
大肠杆菌表达系统是实验室进行蛋白纯化的基本系统,培养费用低,能高效地表达外源蛋白,缺点是不能进行蛋白表达后修饰。杆状病毒-昆虫细胞表达系统能利用昆虫细胞体系进行正确的蛋白后修饰,培养成本也较哺乳动物细胞低,杆状病毒启动子高效启动蛋白表达,并且能容下较大的外源基因组。
使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的基因所需的一般步骤: 与使用同源重组的传统方法相比,使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统产生重组杆状病毒具有以下优点: 1、鉴定和纯化重组杆状病毒所需时间不到2周,而使用同源重组产生重组杆状病毒需要4-6周; 2、由于从选定菌落分离的重组病毒DNA不与亲本、非重组病毒混合,因此减...
Bac-to-Bac 表达系统 I. pFastBac-X重组质粒的构建 利用分子生物学技术构建所需的pFastBac重组质粒,以DH5α为宿主,进行扩增.(以下以pFastBac-X为例进行说明. II. pFastBac-x重组质粒的转座步骤: 1.??制备LB琼脂平板。 LB培养液(含Agar):胰蛋白冻10g/l,Nacl 10g/l,酵母提取物 5g/l,Agar 15g/l 高压灭菌...