1、Bac-to-Bac表达系统pFastBac-X重组质粒的构建利用分子生物学技术构建所需的pFastBac重组质粒,以DH5a为宿主,进行扩增.(以下以pFastBac-X为例进行说明pFastBac-x重组质粒的转座步骤:制备LB琼脂平板。LB培养液(含Agar):胰蛋白冻10g/l,Nacl10g/l,酵母提取物5g/l,Agar15g/l高压灭菌后,培养基温度下降至60C左右迅速...
Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统可以快速、高效的制备重组杆状病毒，该系统依赖一个位点特异性的转座将一...
Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性:•节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体表达盒与 DH10Bac 大肠杆菌感受态细胞中的亲本杆状病毒...
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统促进了重组杆状病毒的快速有效产生。基于Luckow等人1993年开发的方法，Bac-to-Bac杆状病毒表达系统利用Tn7转座子的位点特异性转座特性来简化和增强产生重组bacmid DNA的过程。该系统的第一个主要组成部分是一个pFastBac载体，目的基因将被克隆到该载体中。根据所选的pFastBac载体，目的基因的表...
大肠杆菌表达系统是实验室进行蛋白纯化的基本系统,培养费用低,能高效地表达外源蛋白,缺点是不能进行蛋白表达后修饰。杆状病毒-昆虫细胞表达系统能利用昆虫细胞体系进行正确的蛋白后修饰,培养成本也较哺乳动物细胞低,杆状病毒启动子高效启动蛋白表达,并且能容下较大的外源基因组。
Bac-to-Bac系统的转移载体主要包括两个部分:质粒DNA和负责转染的超低频(bacmid)。质粒DNA是构建表达外源基因的载体,负责携带外源基因并提供所需的表达和复制元件。超低频是一种特殊的质粒DNA,可以在昆虫细胞中实现高效的转染。 在Bac-to-Bac系统中,首先构建质粒DN...
Bac-to-Bac表达系统的优势: 滴度可高至10 8 pfu,可以进行大规模蛋白表达 pFastBac™ 载体含多角体启动子,可获得高得率的重组蛋白 可靠快速的TOPO 5分钟平末端克隆,节省时间 N端及C端添加的6xHis 标签可轻松进行纯化 含有TEV 蛋白酶位点可用于去除N端及C端的标...
*一个Ecoli宿主,DH10Bac,包含杆状病毒质粒(杆粒)和辅助质粒,在转染pFastBac 表达结构后可以产生重组杆粒。 *一个控制表达的质粒,包括Gus和/或CAT基因,以便在感染细胞后产生重组杆状病毒,表达β-葡萄糖酸酐酶和/或氯霉素乙酰转移酶。 Bac-to-Bac表达系统的优点: 使用这个系统产生重组杆状病毒较传统的同源重组有以下...
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是一种快速、高效产生重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的技术(Luckowetal.1993),利用细菌转座子原理,在大肠杆菌内就能完成重组病毒的构建,取名为Bac-to-Bac表达系统,意即从细菌(bacterium)到杆状病毒(baculovirus),革命性地改变了重组昆虫杆状病毒的构建方法。其基本原理为:将一个改...