一、Annexin V/PI双染法Annexin V/PI双染法是基于生物学功能检测细胞凋亡的方法，即检测细胞膜完整性，可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测，目前流式是最常用的细胞凋亡检测方法之一。原理：Annexin V可与磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合，因此，可以作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。但Annexin...
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡（图1）：图2：用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时，清洗，然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2，左)，而staurosporine实验组...
1、 Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。 2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。 3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作步骤：(一)获得目的基因 1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一...
Annexin V-EGFP的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光通过PI通道(FL2或FL3)检测,建议使用FL3。 荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。 三、注意事项 1. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。
用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI结合使用,就可以检测出细胞群体中的早期...
AnnexinV流式细胞术细胞凋亡5-FU目的:探讨化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肿瘤细胞凋亡的作用特性,同时分析AnnexinⅤ -FITC/PI双标记流式细胞术在检测细胞凋亡中的应用.方法:采用不同浓度的5-FU作用于培养的结直肠癌细胞株colo320,并设不同的时间段, 应用流式细胞术和Hoechst33342荧光染色两种方法观察5-FU诱导肿瘤...
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡(图1) : 图2:用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时,清洗,然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2,左),而staurosporine实验组在54...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒注意事项：1.该试剂盒只能检测活细胞,而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检测。2.细胞凋亡是一种持续变化的动态过程,选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加 3.如果有细菌或真菌污染,会严重...
(AnnexinV-FITC)/ PI双染法检测肿瘤细胞坏死及凋亡情况: 原理: 细胞膜组分磷脂酰丝氨酸(PS)在正常情况下位于细胞膜内侧,当细胞坏死或凋亡时,则迁移至细胞膜外侧。磷脂结合蛋白V(Annexin V)是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,它与PS具有高度的结合力。荧光素FITC标记的Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞膜外侧的磷脂...