Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期，只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）翻向外侧，用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针，并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用，能够准确区分正常细胞、凋亡早期和凋亡晚期细胞。
摘要: 课程组面向本科生开设了利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡的实验项目。该实验加入化疗药物依托泊苷(简称VP-16)诱导Jurkat细胞发生凋亡,使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,在荧光显微镜下拍照计数。实验结果表明:紫外光激发下,早期凋亡细胞呈现绿色荧光,而晚期凋亡细胞和坏死细胞呈现红色...
用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI结合使用,就可以检测出细胞群体中的早期...
Annexin V/PI试验通过annexin V和PI标记区分凋亡早期细胞与坏死/死亡细胞。在细胞凋亡的早期阶段,细胞膜开始失去不对称性,导致PS转运到细胞膜外表面,annexin V偶联物可以检测到它。然而,在细胞坏死,细胞膜破裂的情况下,annexin V偶联物可以进入细胞内并结合内小叶的PS残基...
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,是细胞凋亡检测实验中最常用的一种探针组合。 [检测原理] 在细胞凋亡早期阶段,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)从胞质转至胞外,暴露在细胞外环境中,细胞膜通透性增加,从而被PS特异的Annexin-V探针标记。
Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了...
①用Annexin V检测早期凋亡细胞:Annexin V可以结合细胞膜上的磷酯酰丝氨酸,磷酯酰丝氨酸位于正常细胞膜内侧,不会被检测到,凋亡时外翻到细胞膜外表面,可以被检测到。 ②用PI或者7AAD检测晚期凋亡细胞:早期凋亡的细胞,未丧失细胞膜选择通透性...
了解完Annexin V细胞凋亡实验原理后，下面我们一起看一下具体的实验流程。1.获得好的实验结果，需要做好实验前的准备工作，首先得设置好实验方案，具体如下（按照Annexin V-FITC/PI试剂盒用流式细胞仪器检测为例）。2.消化贴壁细胞 对于贴壁细胞，先用适量胰酶(不含EDTA)消化细胞，而悬浮细胞可省去此操作。需要...
Annexin V Blocking 待测细胞与未标记的重组 Annexin V 预孵育,然后进行实验,是 Annexin V 细胞凋亡检测的质量控制。原理是预先阻断 Annexin V-FITC 的结合位点,这样可以证明 Annexin V-FITC 凋亡分析的特异性。 1. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1´Binding Buffer缓冲液制成1´106细胞/ml的悬液。
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记荧光染料，利用流式细胞仪检测细胞凋亡。 细胞核染料（PI,DAPI,7-AAD）可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失...