Annexin V/PI双染流式凋亡是利用FITC标记的Annexin V蛋白和PI脱氧核糖核酸来检测细胞凋亡状态,是目前敏感度检测细胞凋亡率最高的方法之一,广泛应用于流式细胞术中研究细胞凋亡。Annexin V/PI双染流式凋亡原理是基于凋亡被动法面的研究。 Annexin V/PI双染流式凋亡原理的基本思想是,凋亡是一种特殊的细胞过程,变态的...
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测...
01实验原理 Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与磷脂酰丝氨酸(PS)高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期,只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)翻向外侧,用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针,并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用,能够准确区分正常细胞、凋亡早期和...
所以,通过Annexin V和PI双染的方法,就可以把早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞区分开来。Annexin V-FITC/PI法的实验步骤:1,细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300g离心5min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬细胞并计数。2,取1-5×10^5重悬的细胞,300g离心5min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离...
而PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在细胞凋亡发生中晚期,由于细胞膜通透性增加,PI透过细胞膜从而标记细胞核DNA。因此Annexin V和PI联合使用,可同时用来鉴定活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞以及核碎片,原理如图一。 图1 细胞凋亡检测 然而在实际进行...
一、Annexin V/PI双染法Annexin V/PI双染法是基于生物学功能检测细胞凋亡的方法,即检测细胞膜完整性,可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测,目前流式是最常用的细胞凋亡检测方法之一。原理:Annexin V可与磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合,因此,可以作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。但Annexin...
将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞早期凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。 因此将Annexin V与PI(7-AAD也可以)匹配使用,...
一、原理 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin V进行荧光素(FITC、PE)或Biotin标记,以标记了的Annexin V作为荧光...
Annexin V-FITC/PI双染法基本原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜的胞浆侧。细胞发生早期凋亡后,PS外翻到胞膜侧,Annexin V对PS有高度亲和力,用FITC标记Annexin V,PS外翻的细胞由于结合Annexin V-FITC发出绿色荧光。凋亡晚期,细胞膜结构受损,碘化丙啶(PI)透过细胞膜进入细胞,细胞同时发出红色荧光和绿色...