Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测...
AnnexinV-FITCPI双染法流式细胞术检测细胞凋亡 看到来我们眼科公共平台来使用Fortessa检测凋亡时,看到很多人都是泪流满面,鉴于此,作者大找网络资源结合自己的理解,针对普遍的问题给眼科的童鞋们一个交代,期待对大家有用,期待大家板砖!! Reference 1. Galluzzi L, Aaronson SA, Abrams J, et al. Guidelines for ...
细胞凋亡有别于细胞坏死,它有一系列的细胞形学和生物化学的改变,包括出现染色质浓缩、DNA降解、凋亡小体形成等。 (图片来源网络) 流式细胞术检测细胞凋亡(AnnexinV-FITC/PI双染法) 一、原理 在正常的活细胞,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在凋亡的细胞,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜...
将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞早期凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。 因此将Annexin V与PI(7-AAD也可以)匹配使用,...
4、流式细胞仪定量分析(目前较为常用的方法,也是本期学习的主要内容)细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞术检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分...
Annexin V/PI双染流式凋亡是利用FITC标记的Annexin V蛋白和PI脱氧核糖核酸来检测细胞凋亡状态,是目前敏感度检测细胞凋亡率最高的方法之一,广泛应用于流式细胞术中研究细胞凋亡。Annexin V/PI双染流式凋亡原理是基于凋亡被动法面的研究。 Annexin V/PI双染流式凋亡原理的基本思想是,凋亡是一种特殊的细胞过程,变态的...
流式细胞术是检测细胞凋亡的常用方法。这种方法利用Annexin V-FITC和PI双染法,通过流式细胞仪或荧光显微镜对细胞进行定量分析。Annexin V是一种能与磷脂酰丝氨酸(PS)高亲和力结合的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,而PI是一种不能透过完整细胞膜的核酸染料。通过将Annexin V进行荧光素标记,利用流式细胞仪或荧光显微镜可以检...
Annexin V和PI双染法研究细胞凋亡是经典的流式实验之一,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine, PS)在正常细胞中存在细胞膜内侧,在细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸从细胞膜内侧外翻到细胞膜表面,与Annexin V-FITC结合。而PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在细胞凋...
5mmol/LCaCl2标记液:将FITC-AnnexinV(宝灵曼公司产品)和PI加入到孵育缓冲液中,终浓度均为1ug/ml流式细胞仪实验步骤1.细胞收集:悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中,每样本细胞为(1~5)×106,/mL500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2.用孵育缓冲液洗涤1次,500~1000r/min离心5min。3.用100ul的标记溶液重悬...
15 h,24 h,36 h后,应用流式细胞术和Annexin V-PITC/PI双染免疫荧光法观察细胞凋亡情况.结果 CDDP可以诱导HepG2细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,发生凋亡和坏死细胞的比例增加.结论 化疗药物CDDP诱导肝肿瘤细胞凋亡呈时间和剂量依赖性.AnnexinⅤ-FITC /PI双标记流式细胞术可用于早期细胞凋亡...