1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α...
Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。3，细胞悬液中加入...
15min，随后置于冰上；（5）检测：①流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光（激发波长488nm，发射波长525nm），PI为红色荧光（激发波长535nm，发射波长为615nm）；②在荧光显微镜下用双色滤光片观察，Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。结果判断：图2 不同处理条件下Annexin V/PI双染流式法...
Annexin V-FITC/PI双染色用荧光显微镜观察方法 1． 悬浮细胞染色后，滴一滴细胞悬液于载玻片上，用盖玻片盖上细胞，荧光显微镜下观察。2． 贴壁细胞可以象悬浮细胞那样染色后，滴一滴细胞悬液于载玻片上，用盖玻片盖上细胞，荧光显微镜下观察。贴壁细胞也可以先在盖玻片上培养（根据盖玻片大小，置于24孔...
如果在分析的细胞 群体中没有 PI+细胞,区分 PI+细胞最好是参照双阴性细胞群体,将水平线设在双阴性细 胞以上 0.1-0.3 Log 单位的地方。 注:在阴性群体门以外的细胞可被识为 Ann exi n V 或 Ann exin V 和 PI 阳性的细胞。 荧光显微镜观察: 滴一滴用 Ann exin V-FITC/PI 双染的细胞悬液于载玻片上...
(AnnexinV-FITC)/PI双染法检测肿瘤细胞坏死及凋亡情况:原理:细胞膜组分磷脂酰丝氨酸(PS)在正常情况下位于细胞膜内侧,当细胞坏死或凋亡时,则迁移至细胞膜外侧。磷脂结合蛋白V(AnnexinV)是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,它与PS具有高度的结合力。荧光素FITC标记的AnnexinV可以作为探针检测暴露在细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸...
流式细胞术检测细胞凋亡(AnnexinV-FITC/PI双染法) 一、原理 在正常的活细胞,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在凋亡的细胞,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。因...
小弟这几天在用ANNEXI V/PI双染检测细胞系凋亡,做了3次了,效果非常不理想,主要问题3个:①正常组检测发现凋亡过多,但是镜下观察细胞状态良好;②AV-FITC染色,细胞分群不明显;③双染细胞AV-FITC分群不明显,现在把自己的操作步骤写出来,希望各位老师、同道能给与指点帮助,也欢迎大家讨论,谢谢。
Ø Annexin V荧光双染凋亡试剂盒 Ø Annexin V凋亡检测单品 Ø Annexin V蛋白 实验数据:Annexin V-FITC/PI检测试剂盒分群效果优异 Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h,Annexin V-FITC/PI检测试剂盒染色后FCM检测。Annexin V-FITC单阳为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI双...
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡（图1）：图2：用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时，清洗，然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2，左)，而staurosporine实验组...