Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期，只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）翻向外侧，用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针，并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用，能够准确区分正常细胞、凋亡早期和凋亡晚期细胞。
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
图3. FITC和PI的发射光谱 调节方法:设置对照 空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节荧光通道的光电倍增管电压; 单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用...
PI），PI可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现紅色荧光,用 Annexin V-FITC和碘化丙啶染色后,正常的活细胞不被Annexin V-FITC和PI染色;凋亡早期的细胞仅被Annexin V-FITC染色,PI染色呈阴性;坏死細胞和凋亡晚期的细胞可以同时被 Annexin V-FTC和PI双重染色,以区别凋亡早期细胞。
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡（图1）：图2：用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时，清洗，然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2，左)，而staurosporine实验组...
一、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法 原理:在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作步骤：(一)获得目的基因 1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一...
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一.将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生.碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红...