由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。TUNEL 实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态...
Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细...
以下4 个样本分别是阴性对照、Annexin V 单阳管、PI 单阳管和试验管。 Annexin V Blocking 待测细胞与未标记的重组 Annexin V 预孵育,然后进行实验,是 Annexin V 细胞凋亡检测的质量控制。原理是预先阻断 Annexin V-FITC 的结合位点,这样可以证明 Annexin V-FITC 凋亡分析的特异性。 1. 使用冷的PBS缓冲液洗...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒注意事项：1.该试剂盒只能检测活细胞,而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检测。2.细胞凋亡是一种持续变化的动态过程,选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加 3.如果有细菌或真菌污染,会严重...
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸(PS)有高度亲和力。当细胞发生凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻到膜表面，而被荧光染料FITC标记的Annexin V结合，可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。Annexin V搭配PI或7-AAD、DAPI等DNA染色液使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。本试剂搭配PI检测...
1、细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)检测的实验步骤: 细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)适用于:细胞未转染GFP或未使用红色药物。 1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,须把EDTA洗去,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色; 2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清; ...
1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。
图3. FITC和PI的发射光谱 调节方法:设置对照 空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节荧光通道的光电倍增管电压; 单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用...
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡（图1）：图2：用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时，清洗，然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2，左)，而staurosporine实验组...