01实验原理 Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与磷脂酰丝氨酸(PS)高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期,只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)翻向外侧,用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针,并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用,能够准确区分正常细胞、凋亡早期和...
Annexin V-FITC/PI法的原理: 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜,此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,当细胞发生凋亡时,细胞膜的结构发生改变,这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面,这种现象在凋亡的早期就会出现,因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细...
将盖玻片倒在载玻片上并使细胞可视化。 与膜联蛋白V缀合物一起孵育后,也可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。 3.2 在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。 Annexin V, FITC标记光谱图
Annexin V是一种细胞外磷脂结合蛋白,其结合于凋亡细胞外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)残基上。而FITC(荧光同种异质体)是一种绿色荧光染料,可以用于免疫荧光标记。 Annexin V-FITC细胞凋亡检测原理基于以下三个主要步骤:标记、联合染色和流式细胞术检测。 第一步是标记。使用Annexin V-FITC试剂盒对细胞进行标记。该试剂盒...
5.染色孵育后,立即进行流式细胞仪检测或荧光显微镜检测。流式细胞仪检测时,以Annexin V-FITC为例,可使用FITC通道(通常是FL1)检测Annexin V-FITC。PE通道(通常是FL2)检测PI。用流式软件进行分析,以FITC为横坐标,PI为纵坐标,绘制双色散点图。流式结果图:凋亡实验中主要分析细胞凋亡早期,流式凋亡结果图...
一、检测原理 Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生 凋亡时,膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被荧光染料 FITC 标记的 Annexin V 结合,可 通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide,...
因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。活性氧检测试剂盒 Caspase 3活性检测试剂盒 一氧化氮检测试剂盒 脂质过氧化(MDA)检测试剂盒 硫氧还蛋白氧化...
Annexin V染料是检测细胞凋亡时最常用的一种流式检测试剂,我们通常购买产品时所说的凋亡检测试剂盒里的主要成分也往往是它。本期专题针对Annexin V实验检测中涉及的实验原理,试剂的选择,染色流程,实验注意事项,上机设置,结果分析,及常见问题等进行系统性的总结,便于