细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
1. 细胞处理后的第二天，在显微镜下观察细胞状态，如死细胞较多且细胞密度较低，需要进行换液操作。（1）悬浮细胞请在高倍镜下观察，一般而言，活细胞轮廓圆润、界限清晰、透明度大、折光性强。如细胞活率较高，则继续正常培养。（2）贴壁细胞如观察到较多细胞漂浮，请在高倍镜下观察，判断漂浮着的细胞是死细胞...
制备细胞悬液 1.吸弃上清液。 2.向离心管内加入适量完全培养液,吹打制成细胞悬液。 3.用培养液悬液混悬沉淀细胞,细胞计数调整细胞浓度,放入培养箱中培养。 细胞计数 细胞浓度以5×105/mL为宜。 培养细胞 将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃,5%CO2的培养箱内2-4h(或者24-48h)后...
三、细胞的复苏与冻存(原则是慢冻速融) 1. 细胞复苏:指将冻存的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。 复苏过程如下图所示: 常见问题解答: Q:为什么细胞复苏后,很多难以贴壁? A:忽略培养基的问题,主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快,可不时摇动冷冻管,使...
传代开始: 将细胞从培养箱拿出,放进超净台(可以75酒精消毒,但需盖紧,防止酒精进入) 总原则:为了避免污染,非必要不打开皿盖!!! 1.打开皿盖(将皿盖尽量放到自己接触不到的地方)用移液器或吸痰器将废液吸取干净 2.加入随便2-3ml的PBS洗两次(贴壁细胞,不要把PBS直接打到细胞上,枪头对着皿壁打) PBS:磷酸缓...
4. 一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。 细胞传代 具体操作: 一. 传代前准备: 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净...
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养...
细胞培养已成为生命科学和医学研究中不可或缺的基础工具。在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到...
A:目前细胞冻存多采用DMSO二甲基亚砜或甘油作保护剂,细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1,一般高浓度血清有助于维护细胞活力,复苏存活率在80%～90%以上。 Q:若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱...