细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
以25 cm2 的培养瓶为例,向瓶内加入 1ml 胰蛋白酶-EDTA(请根据各细胞的指引使用合适的浓度)消化液,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,放到 37 ℃ 孵育。通常,几分钟内,会发现胞质回缩、细胞间隙增大,倾斜培养瓶时细胞层能自然流下,此时应加入 2-3ml 含血清的完全培养液终止消化(细胞解离所需时间请参...
8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,...
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱...
（3）半贴壁细胞：收集培养容器上清中的所有细胞，250 g离心4 min后弃去上清。使用预热的完全培养基重悬，接种至原培养容器中。3. 之后，每2~3天更换一次完全培养基，后续根据细胞生长密度和状态传代或冻存。注意: 若发现异常情况，应及时排查原因，并与我们联系。细胞传代 1. 预热完全培养基（贴壁和半贴壁细胞...
2) 悬浮细胞培养传代:移液管吹打细胞收集到离心管中,若是悬浮细胞吹打重悬后移入离心管(无胰酶消化步骤),1000rpm 室温离心5min,弃去上清,加入适量培养基重悬,细胞计数后吸取所需细胞到培养器皿,补加培养基,37℃,5% CO₂孵箱培养。 四、细胞冻存与复苏 ...
1、1,细胞培养,2,一 原代培养(略),3,二. 传代培养,准备及注意事项 换液传代冻存复苏 MTT,4,准备事项,紫外灯照射细胞室30分钟,风机运行10分钟后方可进入实验室. 穿专用的口罩,帽子,拖鞋,工作衣等. 带手套,并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作...
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是...
细胞培养-复苏-传代换液-冻存计数(自编) LT (3)然后在无菌下取出细胞。冻存管用75%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液。 (4)在1000r/min速度下离心5～10分钟,弃去上层液,加入适量培养液后接种于培养瓶中,接种浓度1×109/L,置37℃温箱静置培养,次日更换一次培养液,...
A:目前细胞冻存多采用DMSO二甲基亚砜或甘油作保护剂,细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1,一般高浓度血清有助于维护细胞活力,复苏存活率在80%～90%以上。 Q:若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?