9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 11. 继续培养:用...
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
1.细胞传代3.细胞铺板4.细胞冻存5.细胞复苏 细胞传代 原因及概念：培养的细胞由于细胞增殖，密度过大，出现接触抑制，导致细胞难以 继续生长繁殖，甚至死亡，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散，以一定的比例转移到另外的容器中进行培养，即为细胞传代。细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）首先，镜下观察细胞密度，90%...
预习报告一第8组复苏和传代培养实验器材器材:青霉素瓶,烧杯,镊了,酒精,酒精棉,泡沫塑料板,大呔针,纱布,棉绳,十•皮纸,胶头吸管,超净工作台,疲液缸,电热恒温箱,打火机,离心机。溶液:洒精,腆洒,Hanks液,培养液,胰蛋白酶液,血淸液,EDTA液,冻存细胞。实验步骤一、无菌室准备1、实验环境无菌处理:(1)无菌室...
(4)一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。 1.4 细胞传代 1.4.1 传代前准备 (1)预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS 液和胰蛋白酶的瓶 1 子放入 37℃水浴锅内预热。 (2)用 75%酒精擦拭经过紫外线照射的生物安全柜内台面和双手。 (3)正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,...
传代:两种方法(带/不带胰酶中和) 加胰酶前用生理盐水冲一下 血清中和水平 血清:0.25%胰酶=0.2-1:1 (1ml胰酶+2ml培养基) 冻存:4度10分钟,不要超过1小时 -80度过夜 液氮 不要让细胞在-4到+4度时间过长 FBS20%, DMSO10%,培养基70%,对于珍贵细胞可提高血清浓度 复苏: 1. 目前不主张离心...
1、郭美琼,指导员卢嘉海,欧阳丽萍,cos 7细胞的冷冻保存和复苏传代培养,1、研究目的,观察cos 7细胞培养的特点,了解COS7细胞的用途,2、建立COS7细胞培养的方法,主要说明COS7细胞培养的体系,3、观察COS7细胞培养的特点,无论是贴壁细胞还是悬浮细胞。细胞培养过程中的形态变化,分裂和生长的形式等。4、了解COS 7细胞...
细胞复苏操作示意图 传代 一、 贴壁细胞传代操作步骤 1.用移液管或者巴氏吸管吸取培养液; 2.使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞1-2次; 3.弃PBS,加入胰蛋白酶-EDTA消化液(消化液浓度根据各细胞不同有调整),轻轻摇晃培养瓶,使胰酶与细胞表面充分接触,37 ℃孵育2-3 min,加入含血清完全培养基终止消化。
1.汲取传代后的细胞悬液,离心,去掉培育液,参加冻存液,分装冻存管(冻存管内细胞数目通常为(5～10)×106个/ml,2ml冻存管中通常放1～1.5ml细胞)。 2.按步冻存 o冷冻保留办法一:规范的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min;当温度达-25℃以下时,可增至-5～-10℃/min;到-100℃时,则可敏捷浸入液氮中。