其他细胞株可以结合细胞形态、特性和物种鉴定来进行确认。 二、细胞培养、传代、冻存和复苏 1.细胞培养准备工作 根据培养细胞的特性,提前准备好适合的培养基和血清等。最好沿用细胞原来的培养条件,以免细胞在新环境下还需要过渡适应。同时,充分了解到细胞的生长特性和形态特征,便于后续的培养观察。 细胞培养用相关试剂:...
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞...
9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 11. 继续培养:用...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
复苏: 复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。具体步骤如下: 1.细胞解冻:将冻存的细胞管迅速取出,直接放入37摄氏度的水浴中,轻轻摇动直至融化。 2.加热离心:将解冻的细胞液转移到新的离心管中,离心5分钟。去除上清液后,加入预暖的培养基轻轻悬浮细胞。 3.细胞计数与铺板:将悬浮的细胞进行计数,根据...
细胞复苏操作示意图 传代 一、 贴壁细胞传代操作步骤 1.用移液管或者巴氏吸管吸取培养液; 2.使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞1-2次; 3.弃PBS,加入胰蛋白酶-EDTA消化液(消化液浓度根据各细胞不同有调整),轻轻摇晃培养瓶,使胰酶与细胞表面充分接触,37 ℃孵育2-3 min,加入含血清完全培养基终止消化。
4.细胞冻存 5.细胞复苏 ;细胞传代;细胞传代的环节(贴壁细胞为例);细胞传代的环节(贴壁细胞为例);细胞处理过程;;细胞铺板;培养器皿;细胞培养板中加入细胞的数量,需要考虑一下几点: 1.常规试验的设计:转染siRNA(约30%-50%),转染质粒(约70%-80%),还要综合考虑转染试剂对细胞密度的规定等。 2.细胞生长的速度...
(W—种S苏方法:取出存放盒和待S苏管,将苏管立即投入37-38C°的水中,充 分晃动lmin,管内融化后,直接培养复苏细胞24小时后,进行换液。) (三)传代培养(贴增细胞): 1、入台处理:(1)取出培养瓶,打开,瓶盖过火消毒放在泗精棉球上,瓶口消毒倒去培养 ...
1.细胞传代3.细胞铺板4.细胞冻存5.细胞复苏 细胞传代 原因及概念：培养的细胞由于细胞增殖，密度过大，出现接触抑制，导致细胞难以 继续生长繁殖，甚至死亡，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散，以一定的比例转移到另外的容器中进行培养，即为细胞传代。细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）首先，镜下观察细胞密度，90%...
细胞复苏、培养、传代、冻存、细胞计数和MTT 佳木斯大学 张明磊 细胞复苏 •细胞冻存管从-80℃取出，迅速置于37℃水浴锅中于1min内迅速融化至室温。培养 •于操作台内混匀后吸出冻存细胞液移至15ml离心管中，1500rpm3min(1000rpm5min)。吸弃培养液，加入新鲜培养液，重悬混匀。•向新培养瓶中加入新培养液...