细胞冻存管:含有待复苏的细胞,需明确标记细胞名称、冻存日期、细胞代数等信息。 细胞培养用培养基:准备适量的细胞培养所用的完全培养基,根据细胞类型确定其配方,如 RPMI-1640、DMEM 等,并添加10%的胎牛血清(FBS),根据细胞不同,血清浓度可能会有变化,具体以培养细胞时需要的血清浓度为准,已在37℃预热。 培养瓶...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
确认传代:取培养皿置于显微镜下观察,细胞密度达80%-90%时,可进行传代培养。 准备工作:在生物安全柜内,依次摆好离心管、吸管、枪头、培养皿、10% DMEM、0.25%胰酶和PBS液等。用酒精喷涂台面后,打开紫外线照射30分钟进行常规消毒。 润洗细胞:吸去旧培养上清液,用3ml PBS液润洗1到2次。 开始消化:加入0.25%胰酶1...
3.2 悬浮细胞传代 因悬浮生长细胞不贴壁,故传代时不必采用酶消化方法,而可直接传代或离心收集细胞后传代。 直接传代时,静置 5-10 分钟,待悬浮细胞慢慢沉淀到器皿底部后,吸掉 1/2-2/3 原培养液,补足新鲜的含血清完全培养液,混匀成细胞悬液。按各细胞指引推荐的传代比例,把细胞悬液均匀分到各培养器皿中,轻轻摇...
细胞传代 🌱 一旦细胞正常生长并达到足够的密度,就可以进行细胞的传代。具体消化传代时间取决于细胞类型与细胞密度。如果复苏后的细胞过少或状态不够稳定,可以原瓶传代培养,待细胞状态稳定后再进行实验。 注意事项 ⚠️ 每种类型的细胞可能有特定的复苏步骤,因此最好根据特定的细胞系和实验要求来调整和优化复苏过...
2、细胞复苏 注意:细胞从液氮拿出来之后一定要迅速解冻。 3、细胞传代 当培养细胞增殖达到一定密度(70%-80%)后,将会出现密度抑制现象,表现为细胞的生长和分裂速度逐渐减慢,甚至停止。贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层(悬浮细胞会充满整个体积的培养液),并铺满培养瓶底部,如果不及时进行分瓶处理,细胞将会逐渐走向...
细胞复苏是指将冻存在液氮或-80℃的细胞解冻,恢复其生长的过程。 操作原则:快!慢冻速融里的速融就是指细胞复苏过程。 步骤: 1、 准备工作:预热完全培养基。多少℃培养的细胞就预热到多少℃ 在生物安全柜/超净工作台中,准备好细胞培养瓶/皿,并在其中添加足量预热...
🌊 细胞复苏 从冷冻保存中取出细胞,迅速放入37°C水浴中解冻。 解冻后,将细胞转移到含有新鲜培养基的培养皿中。 轻轻摇动培养皿,使细胞均匀分布。 放入37°C、5%CO2的培养箱中培养。❄️ 细胞冻存 当细胞状态良好时,可以进行冻存。 将细胞转移到离心管中,离心后弃上清。
2、细胞复苏 注意:细胞从液氮拿出来之后一定要迅速解冻。 3、细胞传代 当培养细胞增殖达到一定密度(70%-80%)后,将会出现密度抑制现象,表现为细胞的生长和分裂速度逐渐减慢,甚至停止。贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层(悬浮细胞会充满整个体积的培养液),并铺满培养瓶底部,如果不及时进行分瓶处理,细胞将会逐渐走向...
🧪 复苏、冻存、传代操作 复苏:将冻存的细胞迅速放入37℃水浴中快速解冻,避免反复冻融。 冻存:选择生长状态良好的细胞,按一定比例加入保护剂,缓慢降温后存入液氮。 传代:当细胞密度达到一定值时进行传代,注意消化时间和操作手法,避免对细胞造成损伤。通过这些操作和注意事项,可以更好地进行细胞培养实验,确保实验...