根据细胞沉淀的量,加入适量预冷的冻存液,一般按照1×10^6 - 5×10^6个/ml细胞密度进行重悬。 用移液枪轻轻吹打细胞沉淀,使细胞均匀分散在冻存液中,确保细胞密度适中,避免细胞团聚。 重悬后的细胞,尽量减少细胞存放于室温的时间,尽快进入冻存阶段。 4.细胞分装与冻存: 将重悬后的细胞悬液分装至标记好的冻存...
不过可惜的是并非所有细胞均可进行 STR 鉴定,目前只有大部分的人源细胞株和 45 个种类的小鼠细胞株可以进行鉴定。其他细胞株可以结合细胞形态、特性和物种鉴定来进行确认。 二、细胞培养、传代、冻存和复苏 1.细胞培养准备工作 根据培养细胞的特性,提前准备好适合的培养基和血清等。最好沿用细胞原来的培养条件,以免...
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞...
8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,...
复苏: 复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。具体步骤如下: 1.细胞解冻:将冻存的细胞管迅速取出,直接放入37摄氏度的水浴中,轻轻摇动直至融化。 2.加热离心:将解冻的细胞液转移到新的离心管中,离心5分钟。去除上清液后,加入预暖的培养基轻轻悬浮细胞。 3.细胞计数与铺板:将悬浮的细胞进行计数,根据...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
细胞复苏操作示意图 传代 一、 贴壁细胞传代操作步骤 1.用移液管或者巴氏吸管吸取培养液; 2.使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞1-2次; 3.弃PBS,加入胰蛋白酶-EDTA消化液(消化液浓度根据各细胞不同有调整),轻轻摇晃培养瓶,使胰酶与细胞表面充分接触,37 ℃孵育2-3 min,加入含血清完全培养基终止消化。
有很多日常的实验，都需要做细胞离心，比如：原代细胞分离细胞传代培养免疫细胞分离检测前细胞样品处理 ……细胞为什么要离心？1．保证细胞转移的完全性 低速离心可以防止细胞液积存在管盖和管壁，保证细胞转移的完全性。2．便于控制细胞浓度 对于细胞浓度要求高的实验，比如需要根据细胞数计算染料浓度的实验，根据细胞数...
原代细胞复苏和传代流程详述 一、实验前准备工作: 1、培养瓶的包被:包被液如多聚赖氨酸(PLL,ScienCell品牌,货号0403或0413)或纤维粘连蛋白(BPF,ScienCell品牌,货号8248),以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。37度孵箱1小时或4度过夜,从包被好的培养瓶中回收多聚赖氨酸,并用无菌水洗涤培养瓶2遍。包被好...
细胞复苏和传代 细胞的复苏和传代 提纲 •原代细胞的特点•细胞的传代•细胞的冻存与复苏•细胞的运输•可能的问题 提纲 •原代细胞的特点 原代细胞的特点（为什么购买原代细胞）•原代细胞(primarycell)是指从机体的组织中经蛋白酶或其它的方法获得、并在体外进行培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养...