细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
以25 cm2 的培养瓶为例,向瓶内加入 1ml 胰蛋白酶-EDTA(请根据各细胞的指引使用合适的浓度)消化液,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,放到 37 ℃ 孵育。通常,几分钟内,会发现胞质回缩、细胞间隙增大,倾斜培养瓶时细胞层能自然流下,此时应加入 2-3ml 含血清的完全培养液终止消化(细胞解离所需时间请参...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 细胞复苏操作过程 二、细胞...
8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,...
细胞传代 1. 预热完全培养基（贴壁和半贴壁细胞还需要预热胰酶和PBS）。2. 细胞收集。（1）悬浮细胞直接收集培养容器中的所有细胞悬液至离心管中。（2）贴壁/半贴壁细胞需要对细胞进行消化处理，步骤如下：① 用PBS洗涤细胞2次。洗涤过程中注意动作轻柔，清洗全面。贴壁细胞直接弃去培养容器中的培养上清。用PBS洗涤...
培养细胞 将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃,5%CO2的培养箱内2-4h(或者24-48h)后换液继续培养培养,换液的时间根据细胞情况而定。 记录复苏日期 结果分析 判断细胞复苏成功与否,需要看复苏后细胞贴壁率及细胞存活率(细胞存活率将冻存管内剩余的细胞,台盼蓝染色法检测复苏细胞的存活率...
细胞冻存 image 具体操作: 一、冻存前准备 1. 准备适量冻存管,做好标记后置于4℃冰箱预冷; 2. 配制冻存液,一般为用培养液配制10% DMSO; 3. 梯度冻存盒。 二、细胞冻存: 1. 按照细胞传代步骤1-7操作制备细胞悬液并离心; 2. 弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液; ...
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱...
细胞冻存 具体操作: 一、冻存前准备 1. 准备适量冻存管,做好标记后置于4℃冰箱预冷; 2. 配制冻存液,一般为用培养液配制10% DMSO; 3. 梯度冻存盒。 二、细胞冻存: 1.按照细胞传代步骤1-7操作制备细胞悬液并离心; 2.弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液; 3.将1 ml细胞...
1、1,细胞培养,2,一 原代培养(略),3,二. 传代培养,准备及注意事项 换液传代冻存复苏 MTT,4,准备事项,紫外灯照射细胞室30分钟,风机运行10分钟后方可进入实验室. 穿专用的口罩,帽子,拖鞋,工作衣等. 带手套,并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作...