细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层(悬浮细胞会充满整个体积的培养液),并铺满培养瓶底部,如果不及时进行分瓶处理,细胞将会逐渐走向衰老、死亡。 将培养的细胞从一个容器以适当比率转移到其他容器中进行扩大培养,称为细胞传代。 传代培养的目的是实现细胞扩增,为后续实验做准备;避免因细胞进入平台期或衰亡期,而发生大量...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 细胞复苏操作过程 二、细胞...
制备细胞悬液 1.吸弃上清液。 2.向离心管内加入适量完全培养液,吹打制成细胞悬液。 3.用培养液悬液混悬沉淀细胞,细胞计数调整细胞浓度,放入培养箱中培养。 细胞计数 细胞浓度以5×105/mL为宜。 培养细胞 将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃,5%CO2的培养箱内2-4h(或者24-48h)后...
细胞传代 具体操作: 一. 传代前准备: 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3. 正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不...
细胞传代 1. 预热完全培养基(贴壁和半贴壁细胞还需要预热胰酶和PBS)。2. 细胞收集。(1)悬浮细胞直接收集培养容器中的所有细胞悬液至离心管中。(2)贴壁/半贴壁细胞需要对细胞进行消化处理,步骤如下:① 用PBS洗涤细胞2次。洗涤过程中注意动作轻柔,清洗全面。贴壁细胞直接弃去培养容器中的培养上清。用PBS洗涤...
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清,用PBS或盐水清洗1-2次;②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱...
细胞冻存 image 具体操作: 一、冻存前准备 1. 准备适量冻存管,做好标记后置于4℃冰箱预冷; 2. 配制冻存液,一般为用培养液配制10% DMSO; 3. 梯度冻存盒。 二、细胞冻存: 1. 按照细胞传代步骤1-7操作制备细胞悬液并离心; 2. 弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液; ...
A:目前细胞冻存多采用DMSO二甲基亚砜或甘油作保护剂,细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1,一般高浓度血清有助于维护细胞活力,复苏存活率在80%~90%以上。 Q:若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?
第三步:细胞传代 细胞生长期保持,对数生长期 取出培养瓶前操作: 对实验柜消毒,准备好实验仪器 检查培养瓶是否有污染或变质现象 对于贴壁细胞,使用移液枪将使用过的培养基,清除掉 用平衡盐溶液(DPBS)冲洗细胞 *不要使用带Ga和Mg的溶液,会抑制消化液功能* ...