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1)将浓度为6 μg/ml 的polybrene加入2×10^5/ml悬浮细胞中,并加入适量病毒,充分混匀后在37摄氏度下孵育。或者进行室温离心,离心速度为150g,持续4小时(对于难以转染的细胞系,可选择此步骤以提高转染效率)。 2)对于对polybrene毒性敏感的细胞,转染后4小时,加入相同体积的新鲜培养基以稀释polybrene。 3)继续培养3...
1、 慢病毒转染前 18‐24 小时, 将贴壁细胞以 1×105/孔铺到 24 孔板中。 使细胞在慢病毒转染时的数量为 2×105/孔左右。 2、 第二天, 用含有 6 μ g/ml polybrene 的 2ml 新鲜培养基替换原培养基, 加入适量病毒悬液。 37℃孵育。 3、(针对 polybrene 毒性敏感的细胞选作此步骤 ) 4 小时后加入 ...
2. 感染病毒时培养基量少,以保证病毒的浓度,在培养 10h 左右可根据培养基颜色加培养基。 3. 在不明确细胞感染复数情况下,可进行浓度梯度感染,计算细胞感染复数。 4. 在加病毒后一般 24h 左右可换液,48 小时即可看荧光,具体时间根据细胞状态来看。 感染后的细胞检测方法 6.1 荧光初步检测 若有荧光,则表示病毒...
一、贴壁细胞的转染 1.提前一天将细胞接种6孔板,每孔细胞数约为1×105 个, 2.第二天,待细胞贴壁后,换液, 3.加入1mL完全培养基,再加20 μL 慢病毒, 4.混匀后继续培养, 5.12h后观察细胞状态,并更换为新鲜培养基, 6.转染1周后,观察细胞生长情况,中途可以换液,保持细胞的活性, ...
收毒时机:转染后 24、48 h 观察细胞生长状态及荧光状态,生长状态良好一般于 48 h 第一次收集病毒 上清,换液后于 72 h 再次收集病毒上清。过早收毒:病毒包装未完成,滴度低;过晚收毒:长时间不收集细胞上清,换液,细胞状态差,细胞碎片多。 2023-02-15 15:516回复 bili_1607 悬浮细胞总是往中间聚集怎么办 ...
物理转染：包括基因枪法和电击法。基因枪法利用高速运动的粒子，将DNA或RNA撞击到细胞膜上，从而进入细胞。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入（实验条件控制较严、难度较大）。物理转染的优点在于可以直接将DNA或RNA导入到细胞内，而不需要使用任何化学物质。病毒转染：利用病毒作为载体，将外源基因包装...
三、流程描述制备腺病毒颗粒的穿梭质粒及其骨架质粒,上述质粒载体分别进 行高纯度无内毒素抽提,用转染试剂RNAi-Mate 进行共转染293A 细胞,转 3 染6 小时后更换为完全培养基,培养7-15 天,每3 天左右补充一次新鲜培养 基,然后收集细胞和上清液置于离心管中,冻融三次,4000 rpm 离心10 分钟, 取上清即为病毒液...
1.慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10 ^ 5 /孔的速率铺展到24孔板中,慢病毒转染过程中的细胞数约为2×10 ^ 5 /孔。 2.第二天,用2 ml含6μg/ ml聚乙烯的新鲜培养基替换原始培养基,并添加适量的病毒悬浮液,在37°C下孵育。 3.(此步骤选择对聚乙烯毒性敏感的细胞)4小时后,添加2ml新鲜培养基...
操作步骤 A 慢病毒制备: 1、提前一周复苏293T细胞,使用10% FBS-DMEM培养基传代3次以上。 转染前一天将生长状态良好的293T细胞用0.25%胰酶消化,得到细胞悬液,计数,然后进行慢病毒质粒转染,稀释到10个/mL; 将293T接种到6孔板(每孔接种2 mL),使其密度为40%。