(4) Day 4(加入病毒 48-72小时后),对于带 GFP 报告基因的病毒,可通过荧光显微镜观测 GFP 荧光强度,对于携带 Puromycin 抗性基因的病毒,换上含适当浓度Puromycin完全培养液(Puromycin 标准终浓度范围为 1-10 μg/mL,不同细胞系Puromycin工作液浓度不同,可查阅文献或者预实验寻找最适Puromycin筛选浓度),筛选出稳定...
<1>.慢病毒转染贴壁细胞 1.慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10 ^ 5 /孔的速率铺展到24孔板中,慢病毒转染过程中的细胞数约为2×10 ^ 5 /孔。 2.第二天,用2 ml含6μg/ ml聚乙烯的新鲜培养基替换原始培养基,并添加适量的病毒悬浮液,在37°C下孵育。 3.(此步骤选择对聚乙烯毒性敏感的细胞)4...
(2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。根据实验按照MOI准确计算慢病毒用量,将其稀释到培养基中,并尽可能保证所获得的含有慢病毒的培养基的总体积为最小体积,以期获得最佳的感染效率。 (3)根据预实验确认MOI=100...
mRNA转染后,根据需要在24小时后得到结果。 2. 在部分实验室,由于血清和培养条件等差异,转染后镜下培养基中可能出现少量黑点状沉淀,为转染试剂和血清中蛋白结合产物,不影响转染结果和细胞状态,可通过换液除去。 如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化: 1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞...