步骤1.稀释病毒:稀释液(靶细胞维持液培养基)400 μL +终浓度5 μg/mL Polybrene,将慢病毒原液按1:20、1:10、1:5加入到稀释液中; 2.24-well,按4×105cells/well(根据细胞种类调整),1000 RPM 3min,取细胞沉淀。将Step 1中各份病毒稀释液分别与每份细胞沉淀重悬,同时建立对照(blank、negative),37°C 5% ...
1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5,那么就用2×10^5的细胞进行转染。 2. 转染过程 ⑴取0.67μg (50pmol) 的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。 注意:无血清稀释液建议采用...