一、慢病毒 转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞 以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基 替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加...
1.提一天将细胞接种6孔板,每孔细胞数约为1×105 个, 2.第二天,待细胞贴壁后,换液, 3.加入1mL培养基,再加20 μL 慢病毒, 4.混匀后继续培养, 5.12h后观察细胞状态,并更换为新鲜培养基, 6.转染1周后,观察细胞生长情况,中途可以换液,保持细胞的活性, 7.当细胞长满板底后,传代至T25培养瓶中。 二、...
病毒颗粒可以通过细胞培养和病毒扩增过程进行大规模生产。 4.细胞转染:将目标哺乳动物细胞培养在培养皿或培养板中,然后将病毒颗粒加入培养基中与细胞进行共培养。病毒颗粒会与细胞表面的受体结合,并进入细胞内部。 5. 核酸导入和表达:一旦病毒进入细胞内部,它会释放出核酸负链,该负链会被细胞核内的转录和翻译机制利用...
(1) Day 1,准备细胞:在 24 孔培养板接种若干孔处于对数生长期的目的细胞和平行对照293T细胞,铺板时细胞融合率为50%左右,每孔加入100 μL培养基,培养箱中培养至细胞贴壁(针对贴壁细胞),进行病毒感染时细胞的最佳融合度为 70% 左右。 (2) Day 2,准备病毒:4°C保存的病毒,取出后轻轻用移液器混匀; -80℃...
慢病毒转染步骤 转染法步骤：1分至适宜浓度的细胞到六孔板中，次日细胞应30%~50%融合 2.第二天，吸掉板中的生长培养基并加入新的含聚凝胺的培养基，加入适当数量的病毒于细胞中（见“决定慢病毒效价”部分），每孔溶液终体积为3ml 注意：考虑到细胞在自旋过程中不一定能完全被培养基覆盖，不推崇减少六孔板中...
步骤1.稀释病毒:稀释液(靶细胞维持液培养基)400 μL +终浓度5 μg/mL Polybrene,将慢病毒原液按1:20、1:10、1:5加入到稀释液中; 2.24-well,按4×105cells/well(根据细胞种类调整),1000 RPM 3min,取细胞沉淀。将Step 1中各份病毒稀释液分别与每份细胞沉淀重悬,同时建立对照(blank、negative),37°C 5% ...
<1>.慢病毒转染贴壁细胞 1.慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10 ^ 5 /孔的速率铺展到24孔板中,慢病毒转染过程中的细胞数约为2×10 ^ 5 /孔。 2.第二天,用2 ml含6μg/ ml聚乙烯的新鲜培养基替换原始培养基,并添加适量的病毒悬浮液,在37°C下孵育。 3.(此步骤选择对聚乙烯毒性敏感的细胞)4...
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4. 实验步骤 (1)胰酶消化细胞,无血清培养基重悬,调整细胞密度为0.5~1×105/ml(根据情况酌情调整),每孔200ul细胞悬液接种至24孔板,培养箱培养过夜。次日进行慢病毒感染,此时细胞的融合度约为70%左右。 (2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃...
贴壁细胞慢病毒转染步骤及方法 一、细胞培养Panc-1细胞,常规培养使用含10% FBS (GIBCO)的DMEM培养基(含1.5 mg/L-Glutamine,100 U/mL penicillin,100 μg/mL Streptomycin)中,37ºC 5% CO2饱和湿度培养箱中培养。 二、病毒侵染实验材料及试剂DMEM培养基+ 10% FBSPBS(Life Science Products&Services)Trypsin-...