选择合适的抗体是 ChIP 实验成功的关键步骤。对于哺乳动物样本,有许多 ChIP 级抗体可用于该步骤的验证。对于无法获得合格抗体的靶蛋白,可在生物样品中表达 HA、myc 或 GST 等融合蛋白,然后利用针对亲和标记的抗体对靶蛋白进行免疫沉淀。 抗体-蛋白质-DNA ...
在对ChIP实验获得的特定DNA产物定量之前,必须对蛋白质和DNA解交联。解交联通常通过加热孵育和/或用蛋白酶K消化蛋白组分来完成。 6、DNA定量 ChIP的标志之一是通过qPCR定量纯化的DNA产物的能力。需要以解交联和纯化后2%的Input DNA(不稀释)、目的蛋白抗体IP后的DNA、IgG抗体IP后的DNA分别作为模板(各取未稀释的DNA 2...
1）取上述50μl离心后的裂解液上清加入到新的离心管中，作为一次免疫沉淀实验的DNA混合物样本。每50μl 裂解液中含有1×106个细胞裂解产物。ChIP反应包括阳性对照抗体管、阴性对照IgG管和目的蛋白抗体管。推荐阴性对照IgG和目的抗体使用同一物种来源。2）在上述50μl片段化染色质样品的离心管中加入上述配制好的450μ...
而且,CHIP 与其他方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP 与基因芯片 相结合建立的 CHIP-on-chip 方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选;CHIP 与 体内足迹法相结合,用于寻找反式因子的体内结合位点;RNA-CHIP 用于研究 RNA 在基因表达调控中的作用。由此可见,随着 CHIP 的进一步完善,它必将会在基因表达调控研究...
步骤 染色质免疫沉淀技术的基本过程可分为如下几步: (一)1.蛋白质-DNA复合物的化学交联 常用甲醛进行生物大分子复合物的化学交联。甲醛能够进入细胞,使蛋白质与DNA或蛋白质与蛋白质之间发生共价交联,稳定细胞内原本形成的复合物。 A. 室温下用PBS离心漂洗培养细胞2次,并重悬浮至约 5 x 105 cells/ ml (细胞总...
9 加入100μl ChIP清洗缓冲液,62℃振荡孵育2 h 10 95℃孵育10 min。然后将样品置于室温冷却。 11 将样本置于磁力架上,将上清液移到一个新的管子中。 3、DNA纯化 1将0.5 ml Bind Reagent A加入每个100 μl的DNA样品管中并混匀。将样本转移至离心柱上管中,12000rpm离心1min。去除下管液体。
其中ChIP克隆测序实验过程如下: 1)用T4 DNA聚合酶(T4 DNA Polymerase)使目的DNA的3'突出末端平滑化,5'突出末端补平,从而形成平滑末端。10 μL反应体系(1 μL 10 X T4 DNA聚合酶缓冲液,1 μL 1 mmol/L 的 dNTP,1 μL T4 DNA 聚合酶,7 μL DNA溶液),37 ℃ 1h。 2)往体系中加入1 μL 10 mmol...
染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是一般的染色质免疫共沉淀的基本步骤: 1.细胞固定:将细胞培养物在适当的条件下进行固定,以维持DNA-蛋白质复合物的结构。 2.细胞裂解:使用细胞裂解液将细胞破碎,释放出染色质。 3.抗体结合:将特异性抗体加入到裂解...
ChIP实验步骤概览: 细胞的甲醛交联与超声破碎 🧬 细胞裂解、除杂及抗体哺育 🧪 分出一半用酚/氯仿抽提,电泳检测超声效果 🔍 免疫复合物的沉淀及清洗 🧼 DNA样品的回收 🧬 PCR分析 🧬具体操作流程可以查看相关图片,实用干货建议收藏📝。如果你对其他生物医学实验也感兴趣,欢迎在评论区留言哦❗❗❗0...