ChIP染色质免疫共沉淀 ChIP(chromatin immunoprecipitation assay, 染色质免疫共沉淀)是研究体内DNA与蛋白结合的重要技术,主要包括ChIP-qPCR和ChIP-seq两种;其中ChIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的已知DNA片段,ChIP-seq用来筛选与目标蛋白结合的未知DNA片段。 先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎DNA至适...
在测序所需样本数量方面,ChIP-chip需要多达 4~5ug的起始样本,通常在杂交之前需要进行连接介导聚合酶链反应(Ligation-mediated polymerase chain reaction,LM-PCR)),可能导致背景增高或竞争性扩增导致假阳性。而ChIP-seq仅需要 ng级起始材料,可以只需要很少的扩增循环或完全不需要扩增,并且随着单分子测序平台以及第三代...
CHIP又分为CHIP-qPCR(已知蛋白和靶序列)和CHIP-seq(已知蛋白和未知序列)。CHIP应用于检测与蛋白结合的DNA序列,常用于研究转录因子或组蛋白修饰。并且CHIP与其他方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选;RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中...
纯化得到的DNA通过ChIP-qPCR定量测定其水平，也可以通过ChIP-seq进行分析。五、ChIP实验注意事项 ChIP实验操作看相对简单，但是实验耗时长，通常需要至少一周的时间完成一次实验，过程繁琐，每一步都很考验实验操作技术，所以看似简单的实验其实需要注意的事项很多。工欲善其事，必先利其器，下面我们一起来看下具体有哪些...
ChIP-seq简介 优势 实验流程 结果展示 客户案例 SCI成果染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,利用该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。 结合高通量的新一代测序技术,通过对...
染色质免疫共沉淀-高通量测序(ChIP-Seq):是指通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集与目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化和文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序,是目前在全基因组水平研究蛋白结合靶DNA序列的重要手段,为转录因子、组蛋白修饰、核小体定位等表观遗传学的研究提供有效方法。
ChIP(chromatin immunoprecipitation assay, 染色质免疫共沉淀)是研究体内DNA与蛋白结合的重要技术,主要包括ChIP-qPCR和ChIP-seq两种;其中ChIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的已知DNA片段,ChIP-seq用来筛选与目标蛋白结合的未知DNA片段。 先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎DNA至适合的长度。细胞裂解后,...
包括交联、细胞裂解(蛋白质-DNA提取)、核酸剪切、抗体免疫沉淀、DNA样本回收,将蛋白-DNA复合物分离出来进一步研究特定的结合蛋白或与其结合的DNA,同时结合qPCR(ChIP-qPCR)可用于检测已知蛋白与特定结合位点的DNA是否结合以及结合的强度,结合二代测序(ChIP-seq)可用于分析目标蛋白在全基因组内的结合情况,用于下游基因的...
染色质免疫共沉淀测序(ChIP-seq)技术原理 蛋白质与DNA相互识别是基因转录调控的关键,也是启动基因转录的前提。ChIP技术是在全基因组范围内检测DNA与蛋白质体内相互作用的一种标准方法[1],该技术由Orlando等[2]于1997年创立,最初用于组蛋白修饰的研究,后来被广泛应用到转录因子作用位点的研究中[3]。 染色质免疫共...