染色质免疫共沉淀法ChIP(Chromatin immunoprecipitation) 在纠结要不要写PCR系列的,但又觉得PCR相对比较简单,那就先写个免疫共沉淀,PCR可以和质粒构建(质粒重构)的部分一起写,ChIP最难是在后面做同western blot部分或者用PCR方式证明蛋白质同DNA相互作用。提取DNA-复合物的过程主要还是依赖试剂盒。 染色质免疫沉淀技术...
染色质免疫共沉淀(ChIP) 染色质免疫共沉淀可以:(1)组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标记”;(2)转录调控分析;(3)药物开发研究;(4)DNA损失与凋亡分析。 1实验方法原理: 在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特...
应用于染色质免疫共沉淀(ChIP)的下游检测方法 除了做验证实验外,ChIP DNA也可进行测序分析和芯片分析,测序分析对应的方法是染色质免疫共沉淀(ChIP-SEQ);芯片分析对应的方法是ChIP-on-chip。 这两种方法都可以用于分析目的蛋白结合的未知序列。 1、实时定量 PCR 用比较精确的实时定量PCR方法检测沉淀的DNA样品,称为实...
实验干货分享小课堂又与大家见面啦,上期研小编给大家简单介绍了CHIP染色质免疫共沉淀实验。 本期给大家分享的是CHIP染色质免疫共沉淀实验操作的注意事项和常见问题,快点拿小本本记起来吧。 CHIP染色质免疫沉淀实验操作 注意事项 细胞的甲醛交联与超声破碎
染色质免疫沉淀技术的原理是：在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定，染色质断裂，染色质免疫沉淀，交联反应的逆转，DNA的纯化，以及DNA的鉴定。因为ChIP实验...
1.1. 实验处理 ChIPseq2 交联和蛋白质结合的 DNA。通过抗体富集特定蛋白质或 DNA 。添加 末端修复、...
5)10000g离心10秒收集管盖及管壁上残留样品,采用磁力架分离磁珠。将上清液小心转移至一个新的试管中。 五、DNA 纯化 采用纯化柱进行DNA纯化(免疫沉淀和input)。 六、鉴定分析 QPCR或者高通量测序的方法检测IP得到的DNA。 七、常见问题 发布于:上海市 平台声明...
本文将会介绍ChIP的原理和实验流程以及实验成功的关键因素。 1.染色质免疫共沉淀实验流程 1.1.甲醛交联细胞 (1)细胞在100mm培养皿上生长到80% ~90%。当第一次使用细胞系做实验时,另外培养两个培养皿,一个用于预测细胞数量,另外一个用于优化超声条件。 (2)去除上清培养液,加入lOmL 1xPBS含有终浓度为1%甲醛(...
ChIP是染⾊质免疫沉淀技术（Chromatin ImmunoPrecipitation assay）的简称，属于免疫 沉淀技术的⼀种，⽤于检测蛋⽩质与DNA的相互作⽤。染⾊质免疫沉淀技术的⼀个重要⽤途是研究某个转录因⼦A（可以是发⽣某些特定修饰，如 磷酸化、⼄酰化等修饰的蛋⽩）是否调控其预期靶基因B的特定转录调控区（...