是获得植物突变体的一种重要方法。T—DNA插入突变最大的用处是构建突变体库,在此基础上构建侧翼序列库;目前在拟南芥中已经建立了接近饱和的T—DNA插入突变体库,该突变体库包含超过225000个独立的T—DNA插入株系,在预测的29454个基因中有21700个基因发生了插入突变[6]。含T~DNA激活标签的拟南芥群体已经获得,...
在突变体研究中,需要的材料是纯合突变体。本次实验意在对模式植物拟南芥T-DNA插入突变体进行鉴定。实验中用到的主要实验方法有:CTAB法提取拟南芥基因组DNA、PCR扩增目的基因片段、琼脂糖凝胶电泳分离核酸。 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。每完成一个循环需2...
模式植物拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定西南大学目录拟南芥的栽培拟南芥T-DNA插入突变体的PCR鉴定实验设计思路和原理实验设计的思路和原理经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。一般是随机突变基因,从表型变化入手去研究和确定基因的遗传规律、结构特征、在染色体上的位置,并克隆基因的序列。
1.熟练掌握植物基因组DNA快速提取的方法;2.掌握利用PCR方法鉴定拟南芥T-DNA插入突变 体的方法。实验材料 ❖野生型(Col)、ibm1突变体(SALK_023533)拟南芥植株 ❖IBM1(AT3G07610)是拟南芥中组蛋白修饰酶的编码基因,能影响植物的诸多的发育和生殖过程。ibm1突变体:开花延迟叶片卷曲果荚短小 花粉粒败育 ...
入到拟南芥基因组中,获得突变体。当外源DNA“击中”某一基因时,这个特定基因就被关闭。农杆菌转化法:Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒,质粒上有一段特殊的DNA区段,当农杆菌侵染植物细胞时,该DNA区段能自发转移,插入植物染色体DNA中,Ti质粒上的这一段能转移的DNA被叫做T-DNA。根据这一现象,将Ti质粒进行改造...
1.熟练掌握植物基因组DNA快速提取的方法;2.掌握利用PCR方法鉴定拟南芥T-DNA插入突变 体的方法。实验材料 ❖野生型(Col)、ibm1突变体(SALK_023533)拟南芥植株 ❖IBM1(AT3G07610)是拟南芥中组蛋白修饰酶的编码基因,能影响植物的诸多的发育和生殖过程。ibm1突变体:开花延迟叶片卷曲果荚短小 花粉粒败育 ...
拟南芥T-DNA插入突变体的PCR鉴定 实验设计的思路和原理 经典遗传学 是从生物的性状、表型到遗传物质来 研究生命的发生与发展规律。一般是随机突变基因,从表型变化入手去研究和确定基因的遗传规律、结构特征、在染色体上的位置,并克隆基因的序列。反向遗传学 则是在获得生物体基因组全部序列的 基础上,通过对靶基因...
实验首先提取拟南芥的DNA,将获得的DNA进行PCR扩增,将扩增好的DNA加入上样缓冲液后与DNAmarker一起进行电泳,用凝胶成像系统对凝胶进行处理,可以看到大小不同的DNA条带分离。通过这种方法鉴定出拟南芥是否为突变体。 关键词:T-DNA插入突变体、DNA提取、PCR、电泳鉴定、凝胶成像系统 1.前言 拟南芥作为生物学研究的模式...
拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒,长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因,感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织,失去分化能力。所以一般实验使用改造后的农杆菌——T-DNA中导入了卡...
如果T-DNA插入某个功插入某个功能基因的内部,特别是插入到外显子区,将造成基因功能的丧失。利用能基因的内部,特别是插入到外显子区,将造成基因功能的丧失。利用农杆菌农杆菌Ti质粒转化植物细胞,是获得植物突变体的一种重要方法。质粒转化植物细胞,是获得植物突变体的一种重要方法。42012.11.28模式植物拟南芥模式植物...