1、 慢病毒转染前 18‐24 小时, 将贴壁细胞以 1×105/孔铺到 24 孔板中。 使细胞在慢病毒转染时的数量为 2×105/孔左右。 2、 第二天, 用含有 6 μ g/ml polybrene 的 2ml 新鲜培养基替换原培养基, 加入适量病毒悬液。 37℃孵育。 3、(针对 polybrene 毒性敏感的细胞选作此步骤 ) 4 小时后加入 ...
3. 在转染后,如果目的细胞系GFP荧光强度弱,可观察293T平行对照组荧光强度,如果293T荧光强度也弱,需要考虑病毒液本身的问题,如果293T荧光强度正常,就需要考虑是不是目的细胞系属于难转染细胞系等其他原因。 4.在转染过程中常常遇到加入病毒液后或者加入Puromycin筛选后细胞状态极差的情况,这个时候细胞通常比较脆弱,在已...
慢病毒转染步骤 转染法步骤：1分至适宜浓度的细胞到六孔板中，次日细胞应30%~50%融合 2.第二天，吸掉板中的生长培养基并加入新的含聚凝胺的培养基，加入适当数量的病毒于细胞中（见“决定慢病毒效价”部分），每孔溶液终体积为3ml 注意：考虑到细胞在自旋过程中不一定能完全被培养基覆盖，不推崇减少六孔板中...
<1>.慢病毒转染贴壁细胞 1.慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10 ^ 5 /孔的速率铺展到24孔板中,慢病毒转染过程中的细胞数约为2×10 ^ 5 /孔。 2.第二天,用2 ml含6μg/ ml聚乙烯的新鲜培养基替换原始培养基,并添加适量的病毒悬浮液,在37°C下孵育。 3.(此步骤选择对聚乙烯毒性敏感的细胞)4...
细胞慢病毒转染方法和步骤 一、贴壁细胞的转染 1.提前一天将细胞接种6孔板,每孔细胞数约为1×105 个, 2.第二天,待细胞贴壁后,换液, 3.加入1mL*培养基,再加20 μL 慢病毒, 4.混匀后继续培养, 5.12h后观察细胞状态,并更换为新鲜培养基, 6.转染1周后,观察细胞生长情况,中途可以换液,保持细胞的活性,...
1 导读:就爱阅读网友为您分享以下“慢病毒转染手册”的资讯,希望对您有所帮助,感谢您对92to的支持! 目的细胞的效率; 如何由于目的基因较大而造成选择的载体不能携带MarkerGene的,可以通过Real-timeRT-PCR检测目的基因的表达来拍评估感染效率。注意: Invabio提供的病毒载体上带有GFP绿色荧光蛋白,用户可以在病毒感染...
5、细胞培养器皿的相关参数 慢病毒载体的包装与纯化 1实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒,四种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后8 h 更换为完全培养基,培养48h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,感染Hela细胞后定量PCR检测病毒滴度。
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一、慢病毒包装步骤 1.实验材料准备：无血清基础DMEM培养基，完全培养液，病毒载体，质粒psPAX2，质粒pMD2.G，293T细胞，PEI转染试剂，灭菌离心管，无菌病毒管，0.22μm 滤膜，96孔板，细胞计数板，移液器，超速离心机，-80℃冰箱，细胞培养箱等。2.细胞传代：293T细胞复苏并传2-3代，将细胞分至培养基中，...
操作步骤 A 慢病毒制备: 1、提前一周复苏293T细胞,使用10% FBS-DMEM培养基传代3次以上。 转染前一天将生长状态良好的293T细胞用0.25%胰酶消化,得到细胞悬液,计数,然后进行慢病毒质粒转染,稀释到10个/mL; 将293T接种到6孔板(每孔接种2 mL),使其密度为40%。