慢病毒转染实验是一种将外源基因导入哺乳动物细胞的有效方法。实验步骤包括以下几个关键步骤：首先，准备慢病毒载体。这通常涉及构建含有目标基因的载体，并将其包装进慢病毒颗粒中。确保载体已正确构建并能够稳定表达目标基因。其次，将细胞培养至对数生长期，准备转染。选择适当的细胞系，确保细胞生长状态良好...
1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞 以1×10360问答^5/孔铺到24孔板中日绿沿型调决攻区板华。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有身照6μg/ml polybrene的2再陆肥组什ml新鲜培养基 替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步...
1. 病毒液储存:如果短时间(3天)内进行实验,可以将病毒液暂放置4℃保存;如不能在短期内全部使用,需将慢病毒液分装后置于-80℃冰箱保存(根据每次的使用量进行分装,将定量的病毒液置于冻存管中,做好日期和储存量标记,封口膜密封)。病毒液可存放于-80℃冰箱约6个月,如储存时间超过6个月,可在使用前重新测定病毒...
1、病毒液应减少冻融次数,每一次冻融滴度会下降2-4,因此收毒时可进行分装以便后续使用。 2、转染时可加polybrene (可提高病毒转染效,需优化佳浓度(2–12 μg/ml))。 3、转染前先调整好细胞状态,收毒不宜太早,应在转染后48h之后收毒。 4、在进行实验时,可将培养皿中的细胞密度设置为4–5 x 10^6 cel...
<2>.慢病毒转染悬浮细胞的实验方法 1.在2×10 ^ 5 / ml悬浮细胞中,以6μg/ ml和适量的病毒添加聚乙烯,并充分混合,在37°C下孵育,或在室温下以150g离心4小时(一些难以转染的细胞系可以使用此步骤来提高转染效率)。 2.(选择对聚乙烯毒性敏感的细胞作为此步骤)4小时后(或离心结束后),添加等体积的新鲜培养...
4. 实验步骤 (1)胰酶消化细胞,无血清培养基重悬,调整细胞密度为0.5~1×105/ml(根据情况酌情调整),每孔200ul细胞悬液接种至24孔板,培养箱培养过夜。次日进行慢病毒感染,此时细胞的融合度约为70%左右。 (2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃...
慢病毒转染实验步骤 Slow virus transfection experiment
转染过程中,操作步骤一定要谨慎。 以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5,那么就用2×10^5的细胞进行转染。 2. 转染过程 ⑴取0.67μg (50pmol) 的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制...
慢病毒转染实验步骤 Slow virus transfection experiment
最佳答案 回答者:网友 慢病毒转染实验步骤Slow virus transfection experiment我来回答 提交回答 重置等你来答 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚与2,6-二叔来自丁基对甲酚两种物质有没有什么区别?它们的作用是不是一样? 十六醇怎么溶行放京及子顾序解 什么醇沸点16 4,6-二氢吡咯并[3,4又界顾合思画-c]吡唑-3...