1. 病毒液储存:如果短时间(3天)内进行实验,可以将病毒液暂放置4℃保存;如不能在短期内全部使用,需将慢病毒液分装后置于-80℃冰箱保存(根据每次的使用量进行分装,将定量的病毒液置于冻存管中,做好日期和储存量标记,封口膜密封)。病毒液可存放于-80℃冰箱约6个月,如储存时间超过6个月,可在使用前重新测定病毒...
1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞 以1×10360问答^5/孔铺到24孔板中日绿沿型调决攻区板华。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有身照6μg/ml polybrene的2再陆肥组什ml新鲜培养基 替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步...
<2>.慢病毒转染悬浮细胞的实验方法 1.在2×10 ^ 5 / ml悬浮细胞中,以6μg/ ml和适量的病毒添加聚乙烯,并充分混合,在37°C下孵育,或在室温下以150g离心4小时(一些难以转染的细胞系可以使用此步骤来提高转染效率)。 2.(选择对聚乙烯毒性敏感的细胞作为此步骤)4小时后(或离心结束后),添加等体积的新鲜培养...
根据实验按照MOI准确计算慢病毒用量,将其稀释到培养基中,并尽可能保证所获得的含有慢病毒的培养基的总体积为最小体积,以期获得最佳的感染效率。 (3)根据预实验确认MOI=100进行后续试验,准确计算好每孔所需病毒原液量。慢病毒使用量=MOI*细胞数目/慢病毒滴度,吸取病毒液加入细胞中,同时加入5ug/mL的Polybrene助转染...
转染过程中,操作步骤一定要谨慎。 以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5,那么就用2×10^5的细胞进行转染。 2. 转染过程 ⑴取0.67μg (50pmol) 的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制...
慢病毒转染实验步骤 Slow virus transfection experiment