1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞 以1×10360问答^5/孔铺到24孔板中日绿沿型调决攻区板华。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有身照6μg/ml polybrene的2再陆肥组什ml新鲜培养基 替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步...
1. 病毒液储存:如果短时间(3天)内进行实验,可以将病毒液暂放置4℃保存;如不能在短期内全部使用,需将慢病毒液分装后置于-80℃冰箱保存(根据每次的使用量进行分装,将定量的病毒液置于冻存管中,做好日期和储存量标记,封口膜密封)。病毒液可存放于-80℃冰箱约6个月,如储存时间超过6个月,可在使用前重新测定病毒...
1.慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10 ^ 5 /孔的速率铺展到24孔板中,慢病毒转染过程中的细胞数约为2×10 ^ 5 /孔。 2.第二天,用2 ml含6μg/ ml聚乙烯的新鲜培养基替换原始培养基,并添加适量的病毒悬浮液,在37°C下孵育。 3.(此步骤选择对聚乙烯毒性敏感的细胞)4小时后,添加2ml新鲜培养基...
(2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。根据实验按照MOI准确计算慢病毒用量,将其稀释到培养基中,并尽可能保证所获得的含有慢病毒的培养基的总体积为最小体积,以期获得最佳的感染效率。 (3)根据预实验确认MOI=100...
转染过程中,操作步骤一定要谨慎。 以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5,那么就用2×10^5的细胞进行转染。 2. 转染过程 ⑴取0.67μg (50pmol) 的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制...
慢病毒转染实验步骤 Slow virus transfection experiment