说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
这有可能是结合较弱或清洗不干净导致的 2、内源的 Co-IP 实验结合较弱或者不结合 可能是蛋白表达较弱,建议做过表达的 Co-IP
4℃,14000g离心15分钟,去除Protein A/G-agarose微球。 使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。 加入一抗,4℃过夜。 14000g离心收集沉淀,用预冷洗涤缓冲液洗涤3遍。 收集上清,进行SDS-PAGE、Western blot或质谱分析。📚 总结: Co-IP是研究蛋白质相互作用的经典方法,虽然存在一些局限性,但通过精心设计和操作,可以...
免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。 相较于其他分子间相互作用...
免疫共沉淀原理,及IP二抗消除轻链干扰, 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 当细胞在非变… 思存 免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、 原理:免疫共...
Co-IP全称Co-Immunoprecipitation，中文学名免疫共沉淀，是一种以抗体和抗原识别专一性为基础，用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来（同时不能破坏蛋白之间的相互作用），然后用预先结合了琼脂...
细胞免疫共沉淀实验(Co-IP)是一种研究细胞内蛋白质相互作用的重要方法。其基本原理是,如果细胞内两种蛋白质(A和B)有直接或间接的相互作用,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入A蛋白的抗体,可以将A蛋白沉淀下来,与其直接或间接相互作用的B蛋白或C蛋白也会一起被沉淀下来。通过Western blot检测沉淀中是否存在...
图1 Co-IP结果示例图（A代表protein A和B有相互作用，B代表protein A和B之间不存在相互作用）对结果进行分析之前，还需要了解图中的标注都是什么含义：IP：即指免疫沉淀（immunoprecipitation），用相应的抗体来纯化富集目的蛋白，例如图中“IP: Flag”的意思是用Flag标签抗体磁珠去拉Flag，与Flag融合表达的蛋白为...
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体...