说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
8. (Bradford 法)做蛋白标准曲线,测定蛋白浓度,测前将总蛋白至少稀释 1:10 倍 以上,以减少细胞裂解液中去垢剂的影响(定量,分装后,可以在-20℃保存一个月) 9. 用 PBS 将总蛋白稀释到约 1 μg/μl,以降低裂解液中去垢剂的浓度,如果兴趣蛋白在细胞中含量较低,则总蛋白浓度应该稍高(如 10 μg/μl) 1...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了...
如果需要获得Protein X和Protein Y存在直接相互的作用的结论,还需要进行一些能证明存在直接相互作用的实验,例如使用体外纯化蛋白的Co-IP, GST pull down、表面等离子体共振检测(Surface Plasmon Resonance, SPR)、共结晶并进行结构测定、核磁共振检测等,以及细胞内的基于距离邻近发生荧光转移的FRET检测等实验。 Co-IP实验...
Co-IP免疫共沉淀实验原理 当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质一蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 Co-IP免疫共沉淀技术应用 1、测定两种目标蛋白质是否在体内结合。
免疫共沉淀(CO-Immunoprecipitation)和免疫沉淀(IP,Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。CO-IP和IP的实验过程很相似,CO-IP是对IP的具体应用,二者有一点差别。 IP:通过免疫沉淀,获得蛋白分子 CO-IP:通过免疫沉淀获得已知的蛋白及与之相互作用的蛋白。
使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。 加入一抗,4℃过夜。 14000g离心收集沉淀,用预冷洗涤缓冲液洗涤3遍。 收集上清,进行SDS-PAGE、Western blot或质谱分析。📚 总结: Co-IP是研究蛋白质相互作用的经典方法,虽然存在一些局限性,但通过精心设计和操作,可以获得可靠的实验结果。0...
免疫共沉淀(Co-IP)实验原理 当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定--种特定蛋白质的新的作用搭档。
免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。相较于其他分子间相互作用检测方法(GST pull down等),免疫共沉淀实验的优势在于蛋白的结合在细胞内完成,能够...
Co-IP 协议与传统的 IP 协议非常相似,不同之处在于 Co-IP 需要更温和的测定条件来保持与结合伙伴的相互作用。 一般步骤如下(图1)。 图1:标准 Co-IP 协议中的步骤。 1. 裂解你的细胞 在这里,您轻轻地打开您的细胞,使您的蛋白质接触到抗体。 裂解方法在 Co-IP 中很重要。 非去污剂、低盐裂解缓冲液是...