方法一:样本与目标蛋白的共孵育 IP抗体+裂解液→加入Protein A/G→Wash→Elution 特点:得率及蛋白纯...
说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
(1)高度特异性:CO-IP免疫共沉淀技术通过选择特定的抗体,可以高度特异地富集目标蛋白质及其相互作用伙伴,减少非特异性的干扰。(2)高灵敏度:CO-IP免疫共沉淀技术可以检测低丰度的蛋白质相互作用,有助于发现新的蛋白质复合体。(3)可定量分析:CO-IP免疫共沉淀技术可以通过Western blot等方法对目标蛋白质及其...
特异性抗体捕获样品中的靶蛋白,形成抗体-靶蛋白复合物,然后利用能够与抗体结合的珠状支持物(例如Nanoab-Aga- rose)来固定和沉淀复合物,同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来,最后洗去与靶蛋白相结合的非特异性蛋白,再通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测。背景说明 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,...
免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。 相较于其他分子间相互作用...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 其原理是如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的...
Co-IP(免疫共沉淀,co-inmunoprecipitation)是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。由于过程中采用了非变性条件,保留了互作及复合体的细胞内状态。相对于酵母双杂交、pull down等方法,其特色之一便是捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内,保存...
免疫共沉淀技术(CO-IP)是体外研究蛋白质相互作用的一种技术。其原理如图1:A蛋白若能与B蛋白相互作用,被磁珠固定的抗A蛋白的抗体便可以将A蛋白、B蛋白共同沉淀下来。现欲研究水稻中抗虫调节蛋白D与C蛋白有无相互作用,将敲除了C蛋白基因的突变株均分为两组,分别导入含有空质粒(含GFP蛋白基因)、重组质粒(含有GFP蛋...
🔬 免疫共沉淀(Co-IP)简介: 免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。🔍 基本原理: 在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体,通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后,可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。🌈...
图1 Co-IP结果示例图(A代表protein A和B有相互作用,B代表protein A和B之间不存在相互作用)对结果进行分析之前,还需要了解图中的标注都是什么含义:IP:即指免疫沉淀(immunoprecipitation),用相应的抗体来纯化富集目的蛋白,例如图中“IP: Flag”的意思是用Flag标签抗体磁珠去拉Flag,与Flag融合表达的蛋白为...