IP样本一般建议新鲜制备并立即使用,如有需要可保存在-80 ℃。 2)预纯化 阴性对照的选择: 与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。 Isotype Control选择: 预纯化的目的: 减少裂解混合物中的非特异性蛋白的含量。
免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation, Co-IP or CoIP)是研究体内蛋白质-蛋白质相互作用以及建立蛋白间相互作用关系的有力工具,是经典的在生理条件下利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体,能够特异性富集所研究的目的蛋白及其结合蛋白的一项技术,是确定蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 Co-IP实...
说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
实验信息 实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告，检测结果可在线查看或打印，并永久保留。Co-IP 结题标准 1、阳性对照即Iput组有条带(且条带大小正确)2、实验组即IP组有条带(且条带大小正确)实验交付内容...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 其原理是如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的...
确切来说，试剂盒的50T代表着能够完成50次免疫沉淀反应，而实际上免疫共沉淀实验需要设置多个组别进行对照验证，因此具体能够完成多少次Co-IP实验由设计方案决定，一般至少需要设置阴性对照、阳性对照、实验组三个组别。※ 预清除步骤的作用是什么？必须要进行吗？这个步骤的目的是为去除样本中可与protein A/G琼脂糖珠...
除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体Y）对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X(抗体Y)。在某些CO-IP实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行蛋白X和蛋白Y的WB检测，该对照组称为output组。免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—...
Co-IP实验结果内容解读 （1）下面是Co-IP实验结果示例图（非实际条带，仅供参考）：A B 图1 Co-IP结果示例图（A代表protein A和B有相互作用，B代表protein A和B之间不存在相互作用）对结果进行分析之前，还需要了解图中的标注都是什么含义：IP：即指免疫沉淀（immunoprecipitation），用相应的抗体来纯化富集目...
(一)Co-IP 优点 1.操作流程较为简便,不需要事先制备大规模蛋白表达文库。 2.可以研究具有修饰的目的蛋白。 3.能够对间接相互作用的蛋白进行捕获,比如对蛋白复合物的多种成分进行鉴定。 (二)Co-IP 缺点 1.检测不到低亲和力和瞬时的互作。 2.不能判断直接互作或是间接互作。 3.需要再实验前预测目的蛋白 ,已...