图1A的IP组结果显示，在第三组沉淀复合物样本中均检测到了Myc和Flag，表明protein A和protein B之间存在相互作用；图1B IP组的第三组样本中只有Flag，而没有检测到Myc，代表protein A和protein B之间不存在相互作用。文献案例分析 了解Co-IP结果图一般含义后，我们再结合文献案例实战分析Co-IP的结果。（案例均引...
结论解读1. Input组Input组:最下面的IB:Myc与IB:Flag两张图片,两个胶图为利用WB验证Myc-HDAC1及FLAG-ChREBP存在的阳性对照 。2. IP组IP组:用于证明IP能正常沉淀目的蛋白是有效的。第二张胶图(IP:Flag,IB:Flag),表示的实验操作是利用anti-FLAG沉淀FLAG-ChREBP蛋白,图上显示经IB验证第二、第三组FLAG-ChRE...
方案三:标签类(Flag,HA,GFP,myc等)IP通过过表达方式,将目标IP蛋白带上Flag,HA,GFP,myc等标签,可极大方便后续的实验检测。 ①可直接选择现成的Flag beads或者磁珠,IP实验会比较容易操作,由于标签抗体非常成熟,IP抗体与WB抗体选择不同种属来源,即可避免轻重链问题。 ②WB选择直接HRP标记的标签抗体(如Flag-HRP mab)...
对于内源性Co-IP实验验证两个已知蛋白(FBW7和YTHDF2)是否存在相互作用,如果最终的结果为阳性(可查看Input组,代表阳性结果),则可以证明两个蛋白之间存在相互关系,比如本文就验证了FBW7可以与YTHDF2结合,存在相互作用。反之,如果结果为阴性(可查看IgG组结果,代表阴性结果),则无法证明两个蛋白之间不存在相互作用,也有...
首先,需要确定融合标签的目的,蛋白纯化首选His-Tag,WB首选Flag-Tag,Co-IP可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc,活细胞成像则应该选择荧光蛋白等。 好了,两种比较经典的co-IP实验结果的图片解读今天就讲解完了。小薇提供语言润色、论文降重和专家评估,有需要的欢迎随时来撩~同事,有任何问题欢迎添加小薇VX随时沟通...
Co-IP实验原理在于，使用目标蛋白抗体免疫沉淀后，结合的目标蛋白与之相连的蛋白质一同被沉淀下来。离心沉淀后，去除未沉淀的蛋白，通过WB检测沉淀物中的目标蛋白和其他蛋白的量，从而分析它们的结合情况。该方法常用于研究蛋白质在细胞内的相互作用。如上图所示，实验结果通过WB条带的灰度值体现。灰度值的...
首先需要说明的是,熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进行Co-IP结果图分析的前提。免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。相较于其他分子间相互作用检测方法(GST pull down 等),免疫...
对于内源性Co-IP实验，验证两个已知蛋白（FBW7和YTHDF2）的相互作用，若结果为阳性，则证明了两个蛋白存在相互作用。反之，阴性结果可能表明蛋白表达量低或其他原因，建议进行过表达Co-IP实验。今天，我们解读了Co-IP实验结果图的解析方法，希望您能更好地理解这些图。关注后续内容，更多解读等您来探索...
Co-IP全称Co-Immunoprecipitation,中文学名免疫共沉淀,是一种以抗体和抗原识别专一性为基础,用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。 通俗点来说,假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用,首先我们通过合适的方法处理样本,将蛋白提取出来(同时不能破坏蛋白之间的相互作用),然后用预先结合了琼脂糖珠或...
免疫共沉淀广泛应用于研究蛋白质相互作用。上图展示了特定处理条件下蛋白质的相互作用情况。例如，“IP”代表免疫沉淀，“IB”表示免疫印迹（WB），而“Input”是原始样品，用于估计IP反应中目标蛋白的含量。在“SENCR shRNA”处理条件下，通过加入抗JUP抗体将JUP蛋白沉淀出来，然后使用抗CDH5抗体检测CDH5...