3.关键基因验证：对筛选出的关键基因进行进一步的验证，包括定量验证、定性验证、基因功能验证以及基因调控...
1、在网页在线搜索https://www.targetscan.org/vert_80/, 进入在线预测网站如图1所示,网站首页包括所预测miRNA的所属物种,筛选的限定选项等;另外通过这个网站我们还以根据已知的靶基因来预测未知的miRNA的结合位点,即输入需要预测的基因名或者输入ENST编号,将显示预测该基因的所有miRNA位点。 图1 TargetScan首页 2、这...
1. 获取靶基因启动子 这里我们主要使用NCBI数据库查找基因启动子序列，一般认为启动子位于基因转录起始位点上游2000bp的范围，这里以人源的CD274为例，查询操作如下：在NCBI搜索CD274的基因信息。点进去后下拉到“genomic context”看到CD274在基因组中的方向为正向。这里需要注意基因转录方向是正向还是反向，这一点与...
言行生物,8年经验,利用荧光素酶(Luciferase)报告基因实验进行miRNA靶基因验证服务,含载体构建、转染、荧光素酶活性检测等,经验丰富。
miRNA靶基因验证技术原理 miRNAs常与靶基因的非翻译区(常为3’UTR)结合,从而抑制整个mRNA的翻译。将待测的miRNA结合位点序列(靶基因3‘UTR全长或结合位点附近500bp序列)构建到荧光素酶基因的下游,将该质粒与miRNA mimics共转染待测细胞;如果miRNA能够结合待测序列,则会抑制上游荧光素酶表达,使荧光素酶底物发光减弱...
本研究通过网络药理学和转录组学高通量测序,确定了Fmo1是连接remifentanil靶基因和HIRI相关基因的关键基因。同时发现发现remifentanil可通过增强Fmo1表达和诱导自噬激活来减HIRI,并在体外体内对其作用的分子机制进行了验证。该研究提示,通过增强Fmo1基因表达,诱导肝脏自噬可能减轻HIRI等肝脏疾病的危害。这一发现对开发新药物...
萤光素酶可以催化 luciferin 氧化成 oxyluciferin,在 luciferin 氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),可通过荧光测定仪设备测定 luciferin 在氧化过程中释放的生物荧光,常应用于启动子转录活性调控及 miRNA 靶基因验证等方向的研究。 萤光素酶的两个应用: ...
通过靶向干扰转录因子的表达,观察其对靶基因表达水平的影响,可以评估转录因子的功能。这种方法通过干扰转录因子的表达,直接验证其在调控下游靶基因中的作用,但需要设计合适的RNA干扰实验方案,并考虑到靶基因表达的调控网络。 4. EMSA技术分析转录因子结合DNA的特异性 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)是一种用来...
这些数据库可以根据miRNA的序列信息和基因组信息,预测miRNA可能的靶基因。 2.实验验证:使用荧光素酶报告基因系统或双荧光素酶报告基因系统进行实验验证。这些系统通常包括将miRNA靶基因的3"UTR区域克隆到报告基因载体中,然后通过转染细胞并检测荧光素酶活性来评估miRNA与靶基因的结合情况。其中,双荧光素酶报告基因系统...
最近进行课题设计,想验证一下microRNA和预测的靶基因是否结合。同时在靶基因3‘-UTR区的SNP是否影响它们的关系。这个SNP位点在种子区,推测也具有一定功能。第一步想克隆microRNA到表达载体,同时克隆3’-UTR区(包括野生型和突变型)到PGL-3 control 荧光素酶基因下游,双转细胞后,利用荧光素酶报告系统检测两者是否结合...