(3)阳性对照组:细胞转染易于检测的基因产物(如GFP)的质粒,可以直接反映转染效率及实验所用试剂的质量情况,还可以为转染全程非特异性毒性提供对照(带荧光标签的载体对照可以直接作为阳性对照)。 2.细胞转染 (1)细胞铺板,以6孔板转染293细胞为例,转染前一天接种0.4×10细胞,培养箱中培养,待细胞密度生长至50-80%时,...
扩增结束后可按照质粒抽提试剂盒对质粒进行提取。提取的 Parkin 过表达质粒和阴性对照质粒，进行测序(一般可交由公司完成测序)。将测序结果与目的基因序列进行比对分析，后续进行质粒转染。质粒抽提怎么选？质粒提取的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA 分开，随后去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。按得...
(3)阳性对照组:细胞转染易于检测的基因产物(如GFP)的质粒,可以直接反映转染效率及实验所用试剂的质量情况,还可以为转染全程非特异性毒性提供对照(带荧光标签的载体对照可以直接作为阳性对照)。 2.细胞转染 (1)细胞铺板,以6孔板转染293细胞为例,转染前一天接种0.4×10细胞,培养箱中培养,待细胞密度生长至50-80%时,...
通过质粒转染,可以实现基因表达、基因敲除、基因敲入等多种目的。在分子生物学和遗传学研究中,质粒转染是一项必不可少的技术。 2. 在质粒转染实验中,常用的质粒类型包括原核质粒和真核质粒。原核质粒一般来自细菌或古细菌,包含有来自原核生物的复制起始点和选择标记基因。真核质粒则多来自真核生物,例如哺乳动物、酵母...
1.准备质粒:选择需要转染的质粒,通常这些质粒含有感兴趣的基因或目标序列。质粒可以通过DNA提取和纯化等方法获得。 2.准备目标细胞:选择合适的细胞系或组织作为目标细胞,这些细胞通常能够容易地被转染。细胞需要在培养基中良好地生长和维持。 3.添加转染试剂:将准备好的质粒和转染试剂混合,转染试剂通常为阳离子脂质体、...
(3)阳性对照组:细胞转染易于检测的基因产物(如GFP)的质粒,可以直接反映转染效率及实验所用试剂的质量情况,还可以为转染全程非特异性毒性提供对照(带荧光标签的载体对照可以直接作为阳性对照)。 2.细胞转染 (1)细胞铺板,以6孔板转染293细胞为例,转染前一天接种0.4×10细胞,培养箱中培养,待细胞密度生长至50-80%时...
一、质粒的质量优化 高质量的质粒制备：确保质粒的纯度和完整性是提高转染效率的基础。在质粒提取过程中，应采用可靠的试剂盒或方法，严格按照操作规程进行。尽量减少蛋白质、RNA 和其他杂质的残留，这些杂质可能会影响转染试剂与质粒的结合以及后续在细胞内的转运过程。通过琼脂糖凝胶电泳可以初步检测质粒的纯度和完整性...
化学介导法中最常用的是钙磷共沉淀法和脂质体转染法。钙磷共沉淀法利用Ca^2+离子和磷酸盐与质粒DNA...
质粒转染是指将质粒DNA导入目标细胞中,使其表达外源基因。质粒是一种环状的双链DNA分子,通常存在于细菌细胞中,具有自主复制的能力。质粒转染技术利用质粒的特性,将外源基因插入质粒中,然后通过物理或化学手段使质粒进入细胞内,从而实现外源基因的表达。 1. 钙磷法:将质粒DNA与钙盐形成复合物,然后将复合物添加到细胞...