质粒转染效率分析 在转染 GFP 报告基因构建体后 48 h,通过显微镜和流式细胞仪评价细胞。为了评估转染效率,首先通过荧光显微镜观察细胞,以定性评估蛋白表达、形态和活力(图1)。然后,通过吸出培养基并替换为 250 μL 由 TrypLE 试剂与 1X DPBS (7:3) 组成的混合物,制备用于流式细胞分析的细胞。将...
转染 48 h 后,荧光显微镜下观察其 GFP 的表达情况及统计其转染效率 (对明场及暗场荧光细胞计数,得:转染效率 = 暗场荧光细胞个数 / 明场细胞个数;也可通过流式等观察统计其转染情况)。结果显示,阴性对照组和Parkin 过表达组细胞内可观察到较多的绿色荧光蛋白表达,而正常组细胞没有观察到,则质粒成功转染至细胞内...
经典转染技术最初是为了将质粒 DNA 导入细胞而开发,质粒 DNA 目前仍是最常用于转染的载体。可将含有重组基因和调控元件的 DNA 质粒转染入细胞,以研究基因功能和调控,进行基因产物的突变分析和生化表征,研究基因表达对细胞健康和生命周期的影响,以及大规模生产蛋白质用于纯化和下游应用。
高质量的质粒制备：确保质粒的纯度和完整性是提高转染效率的基础。在质粒提取过程中，应采用可靠的试剂盒或方法，严格按照操作规程进行。尽量减少蛋白质、RNA 和其他杂质的残留，这些杂质可能会影响转染试剂与质粒的结合以及后续在细胞内的转运过程。通过琼脂糖凝胶电泳可以初步检测质粒的纯度和完整性，观察到清晰的单一条...
指利用不同的载体物质携带质粒 DNA 通过直接穿膜或膜融合的方法将外源 DNA 分子导入真核细胞,使外源基因表达,从而针对某个基因和蛋白质的功能进行一系列生物学功能研究的方法。 用途 研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产。 材料与仪器 【材料试剂】待转染的细胞、胎...
(3)阳性对照组:细胞转染易于检测的基因产物(如GFP)的质粒,可以直接反映转染效率及实验所用试剂的质量情况,还可以为转染全程非特异性毒性提供对照(带荧光标签的载体对照可以直接作为阳性对照)。 2.细胞转染 (1)细胞铺板,以6孔板转染293细胞为例,转染前一天接种0.4×10细胞,培养箱中培养,待细胞密度生长至50-80%时...
[图片] RFect 质粒转染 是指利用不同的载体物质携带质粒DNA通过直接穿膜或膜融合的方法将外源DNA分子...
化学介导法中最常用的是钙磷共沉淀法和脂质体转染法。钙磷共沉淀法利用Ca^2+离子和磷酸盐与质粒DNA...
质粒转染实验流程..质粒转染实验流程实验准备1. 材料:目的质粒、待转染细胞、细胞培养基、无血清培养基、转染试剂、胰酶、PBS缓冲液、抗生素(可选)、细胞培养皿或培养板。2. 仪器:细胞培养箱、超净工作台、离心机、移液器
质粒转染原理 质粒转染是指利用不同的载体物质携带质粒DNA通过直接穿膜或膜融合的方法将外源DNA分子导入真核细胞，使外源基因表达，从而针对某个基因和蛋白质的功能进行一系列生物学功能研究的方法。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断深入，DNA转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规实验工具。质粒DNA转染方法 ...