扩增结束后可按照质粒抽提试剂盒对质粒进行提取。提取的 Parkin 过表达质粒和阴性对照质粒，进行测序(一般可交由公司完成测序)。将测序结果与目的基因序列进行比对分析，后续进行质粒转染。质粒抽提怎么选？质粒提取的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA 分开，随后去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。按得到质粒
最后吹干质粒，并用高压过的溶解质粒进行定量和浓缩。细胞转染：本实验室常采用invitrogen的细胞转染试剂Lipofectamine2000进行转染操作。在转染前一天，用胰酶消化细胞并计数铺板，确保转染日细胞密度达到90%。细胞铺板在含血清、不含抗生素的正常生长培养基中进行。转染时，用无血清培养基如OPTI-MEMⅠ培养基稀释DNA和Lipofe...
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。下图所示为脂质体介导的外源质粒进入细...
摘要分子克隆技术构建鸡Bcl2基因的重组表达质粒,利用威尼德电穿孔仪转染鸡原代成纤维细胞,探究Bcl2过表达对细胞凋亡的调控作用。实验采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot验证Bcl2蛋白表达水平。结果显示…
过表达质粒的构建及转染 过表达质粒的构建及转染 过表达质粒的构建及转染 质粒及菌液说明过表达质粒为⾼纯度的DNA 粉末制品，经过真空冷冻⼲燥的质粒是呈薄膜状或粉末状附在离⼼管中，请适当离⼼(10000r/min 10~15s)后⼩⼼开启，以免飞扬丢失。请根据实验需要的质粒浓度和质粒的总量加⼊适量的ddH2O ...
作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。
· 重组质粒构建结果：经酶切鉴定和测序验证，成功构建了Homer1基因真核表达重组质粒。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，观察到与预期大小相符的DNA条带；测序结果与GenBank中Homer1基因的cDNA序列完全一致。· 细胞转染结果：Western Blot检测结果显示，p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组细胞中检测到Flag标签蛋白的...
1. 质粒构建：PAX2基因序列通过PCR技术从大鼠胚胎组织中克隆获得，并与真核表达载体（如pcDNA3.1）连接，构建大鼠PAX2真核表达质粒。通过酶切、PCR验证等手段，确认质粒构建正确。2. 细胞培养与转染：采用大鼠肾小管上皮细胞作为研究对象，培养细胞至对数生长期，准备进行转染。转染前，使用某品牌试剂对细胞进行处理...
LAG3慢病毒质粒构建,转染细胞系的建立 LAG3的主要配体为主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(majorhistocompatibilitycomplexll,MHCll)。肿瘤细胞表面表达的LAG3配体分子与其结合,抑制T淋巴细胞激活,发挥负向免疫调节功能。WANG等研究显示:纤维蛋白样蛋白1(fibrinogen-likeprotein1,FGL1)是MHCⅡI之外的LAG3的另一个配体。
基因过表达实验操作由于在基因过表达实验中有多种条件选择,如试剂和细胞株等,在本实验操作中仅以pEX-1空载体为阴性对照,Lipofectamin2000为转染试剂,293T细胞为实验细胞株,按照上述条件分步阐述过表达质粒转染实验的操作过程。如果用户使用不同的细胞株和转染试剂,可根据不同的目的基因和实验条件进行相应的调整。 1、...