不同转染试剂有不同的转染方法,转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法步骤进行实验。另外,由于细胞性质不同、质粒定量差异、操作手法差异等,转染效果可能会不同,应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。 细胞状态和密度 转染前的细胞状态和密度都会影响转染效率以及后续的实验结果。最适合进行转染的细胞是解冻后传代3...
血清一度曾被认为会降低转染效率,老一代的转染方法往往要求转染前后用PBS洗细胞然后在无血清培养基条件下转染,但有些对此敏感的细胞会受到损伤甚至死亡(比如贴壁较差的细胞,在PBS洗涤时很容易冲刷细胞)导致转染效率极低。不过转染产品配方几经革新后的今天,对于主流的转染试剂来说...
1. 电转法原理电穿孔法，又叫电转法，利用电脉冲在细胞膜上形成暂时的孔，使核酸物质能穿过孔进入细胞。首先，使用带电荷的转染试剂将目的基因或者质粒包裹起来，形成转染复合物；然后，细胞在仪器的高场强电脉冲处理之后，会在一侧形成电压差异，从而使得目的基因以类似电泳的方式进入到细胞内。图2：电转法原理图...
细胞转染是指将外源物质引入到目标细胞内的过程。转染试剂起到载体的角色，帮助外源物质穿过细胞膜，并使其保持在细胞内。细胞转染的基本原理有三种：离子类转染试剂：如钙磷法，通过与DNA形成复合物进入细胞，或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行电击转染。载体类转染试剂：如聚乙烯醇、聚合脂质体等，通过与DNA、RNA或蛋白质...
相同点:针对质粒DNA,不论是瞬时转染还是稳定转染,都可以通过物理法(电转、显微注射、基因枪),化学法(阳离子脂质体,阳离子聚合物、磷酸钙),生物法(病毒介导)进行转染;并且转染环节的操作基本一致。 差异点:稳转细胞株构建所用质粒,一定是包含抗性基因,便于后续加压筛选;瞬转所用的质粒可以包含抗性基因也可以不包含...
细胞转染的基本原理有三种: 离子类转染试剂:如钙磷法,通过与DNA形成复合物进入细胞,或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行电击转染。 载体类转染试剂:如聚乙烯醇、聚合脂质体等,通过与DNA、RNA或蛋白质结合形成复合物,并与细胞膜发生相互作用,使其进入细胞。 特殊物质辅助转染:如脂质类试剂伯胺脂质、双链脂质等,通过与DNA或...
进行实验之前,请先规划好实验,一般细胞转染需要24h-72h,所以要充分了解细胞生长速度,计算所需脂质体和DNA的储备量,并确认准备好所需试剂:Opti-MEM无血清培养基,Lipofectamine转染试剂,以及DNA,这个一定要确认好。 1、细胞铺板 (1)一般会选择复苏细胞传代3-4次(汇合率达到90%之前对细胞进行传代,不要长到100%),从...
3.细胞毒性大 3.1转染前 1)核酸纯度不纯也会造成细胞毒性。要确保质粒中无内毒素,使用高纯度的DNA或RNA会降低细胞毒性。 2)转染试剂过量。优化转染试剂的用量,以及优化复合物的比例。 3)要检查稀释复合物的培养基与细胞的相容性,已知DMEM培养基对一些昆虫细胞系有毒性。建议选择合适的培养基。