（📚细胞转染主要分为📌稳定转染和📌瞬时转染两种类型，查看笔记最后两张图片可详细了解一下~）目前细胞转染方法主要分为生物方法、化学方法和物理方法三大类，分别有以下几种：✅生物方法：病毒转染法✅化学方法：阳离子脂质体法阳离子聚合物法磷酸钙共沉淀法DEAE-葡聚糖法✅物理方法：电穿孔法gene枪法（粒子...
生物方法包括病毒转染法;化学方法包括阳离子脂质体法、阳离子聚合物法、磷酸钙共沉淀法、DEAE-葡聚糖法;物理方法包括电穿孔法、基因枪法(粒子轰击法)、显微注射法、激光介导转染法。 1. 病毒转染法 (1) 原理:在经过改造的病毒载体中插入目的基因片段,然后包装成能够产生含有目的基因的重组病毒。这些重组病毒能够感染...
1. 转染试剂的准备 ① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的...
接下来，您可以进行第二次细胞传代等相关操作。）在转染后的24小时，仔细观察实验结果，并详细记录绿色荧光蛋白的表达情况。）随后，进行细胞传代操作，根据免疫染色的适宜密度，将0.8乘以10的5次方个细胞均匀分入每个35毫米的培养皿中。）在常规条件下继续培养24小时后，按照染色所需条件对细胞进行固定处理。
成本低廉，非常适合大规模的转染操作。这一方法常用于贴壁细胞，例如HEK293等细胞的转染。缺点：磷酸钙共沉淀法对反应的pH值和反应时间非常敏感，这可能导致实验结果的不稳定和重复性较差。此外，这种方法并不适用于悬浮细胞的转染。适用场景：贴壁细胞的瞬时转染或稳定转染，特别是在需要大规模转染时。3. 阳离子聚合物...
物理转染法：电穿孔法、显微注射法、基因枪法 化学转染法：磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物法、阳离子脂质体法、DEAE葡聚糖法 生物转染法：病毒介导法 · 不同转染方法之间的区别 对于了解或做过细胞转染实验的研究人员，想必上述方法大家都是非常熟悉的，我们也总结了这些方法的原理以及优缺点比较，帮助大家找到适合...
以293T细胞转染前一天(20-24小时)~0.4×10E6个细胞(具体细胞数取决于细胞大小和细胞生长速度),接种到六孔板中,使其达到70-90%次日转染时汇合。 2、在接下来的转染步骤之前更换新鲜的细胞培养基 培养基的体积约为2ml。 3、轻轻混合Lip脂质体转染试剂 4、取无菌离心管,在250μl DMEM 溶液中加入4μg质粒,用移...
转染是细胞实验中广泛使用的技术,通过转染可将外源核酸(DNA、RNA等)引入细胞,从而对基因的产物或其功能进行研究,是基因编辑细胞构建必不可少的步骤。 按照转染的原理,细胞转染的方法大致可分为物理介导(如电穿孔法、显微注射法、基因枪法)、化学介导(如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、阳离子聚合物介导法等)和生物...
物理方法是通过物理或机械手段将核酸直接转移到细胞质或核中,而无需使用脂质等异物。 显微注射法通过注射DNA,mRNA和蛋白质来操纵单细胞,例如卵母细胞,也可用于将DNA转移到胚胎干细胞中以产生转基因生物。具有高精度高转化率的特点,但是操作难度大且昂贵,...
一、了解常见的细胞转染方法 化学转染法脂质体转染：这是一种常用的方法，利用阳离子脂质体与带负电的核酸结合，形成脂质体 - 核酸复合物，通过与细胞膜融合或内吞作用进入细胞。其优点是操作相对简单，转染效率较高，适用于多种细胞类型。例如，在一些常见的细胞系如 HEK293 细胞中表现出良好的转染效果。但也存在...