测定细胞转染率的方法包括但不限于以下几种: 1.流式细胞术:使用流式细胞仪检测细胞中转染的荧光酶或核酸基因编码蛋白,从而估计出转染效率。 2.西方印迹:使用含有转染基因的质粒和拷贝上载到细胞中,然后浸泡混合物在Tris-HCL液中,用十种或十种以上的底物H2O2转染,在光面板之前通过特殊仪器识别和检测,从而使得转染成功...
2)要检测所用的无血清培养基与转染试剂的相容性,已知CD293, SFMII, VP-SFM 与转染试剂不相容。 3)用了含有血清的培养基制备转染复合物。血清会降低复合物的形成。建议用无血清培养基稀释DNA/RNA和转染试剂。 4)DNA或RNA的复合物形成的比例,一般DNA(µg):转染试剂(µL)=1:2~1:3;而RNA(ng):转染试剂...
原理：与脂质体转染类似，阳离子聚合物通过与核酸结合成复合物，利用细胞内吞进入细胞内。优点：在血清中稳定，细胞毒性较低，转染率高，且性价比高。缺点：同样需要对体系进行条件优化，且某些细胞体系可能不易转染。生物介导——病毒感染 原理：利用病毒侵染宿主细胞，从而将外源基因导入细胞内。优点：具有高转染率，...
细胞转染的方式可以分为3类:化学法、物理法和生物介导方法。电转染作为具有代表性的物理方法转染,出现于1982年,作为通用、易用的细胞转染方法,具有其他方法无法比拟的优势,如重复性好、适用范围广等特点,在一定条件下兼得电转效率和细胞活率,尤其对目前对原代细胞和一般认...
转染是指将外源DNA或RNA引入细胞的过程，通常使用脂质体、病毒载体或物理方法进行。转染效率受到多种因素的影响，包括细胞类型、生长条件、转染试剂和DNA或RNA的量等。以下是导致转染效率低下的常见原因：1. 细胞状态不佳：转染前，细胞的生长状态和密度会影响转染效率。如果细胞生长不良或处于非对数生长期，转染效率...
检测转染效率的关键在于选择合适的报告系统，通过定量分析确定外源基因进入细胞的比例。根据实验目的和条件，常用的检测方法分为直接观察法和间接定量法两大类，不同方法各有优劣，需要结合实际情况灵活选择。直接观察法中，荧光蛋白报告系统操作简便且成本低。构建携带GFP、RFP等荧光蛋白基因的质粒，转染后通过荧光显微镜...
良好的细胞相容性能够确保转染试剂在不引起细胞明显应激反应的情况下，有效地将 DNA 递送至细胞内，提高转染的成功率。转染试剂与 DNA 的比例：合适的转染试剂与 DNA 比例对于获得最佳转染效率至关重要。比例过高可能导致转染试剂过量，引起细胞毒性增加或非特异性吸附，从而降低转染效率；比例过低则可能无法充分包裹和...
1. 细胞状态在进行转染时，我们需要选择合适状态的细胞，一般原代细胞可以传1-2次后使用；尽量挑选迭代次数少的细胞，如果是冻存细胞，建议复苏1-2h后使用。细胞污染对细胞状态的影响很大，受到细菌、真菌或支原体污染的细胞都会导致转染效率降低、细胞死亡率增加。细菌污染细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(...
转染效率评价标准是评价基因转染效果的重要指标之一。其评价标准主要包括转染率、转染效率和细胞毒性等方面。其中,转染率指的是转染剂与细胞发生物理和化学相互作用后,转移到细胞内的基因的比例。转染效率则是指成功转染的细胞中,基因表达的比例。细胞毒性则是转染剂对细胞的有害影响。 评价转染效率需要结合不同的实验系...