2)要检测所用的无血清培养基与转染试剂的相容性,已知CD293, SFMII, VP-SFM 与转染试剂不相容。 3)用了含有血清的培养基制备转染复合物。血清会降低复合物的形成。建议用无血清培养基稀释DNA/RNA和转染试剂。 4)DNA或RNA的复合物形成的比例,一般DNA(µg):转染试剂(µL)=1:2~1:3;而RNA(ng):转染试剂...
测定细胞转染率的方法包括但不限于以下几种: 1.流式细胞术:使用流式细胞仪检测细胞中转染的荧光酶或核酸基因编码蛋白,从而估计出转染效率。 2.西方印迹:使用含有转染基因的质粒和拷贝上载到细胞中,然后浸泡混合物在Tris-HCL液中,用十种或十种以上的底物H2O2转染,在光面板之前通过特殊仪器识别和检测,从而使得转染成功...
高的转染效率需要一定的细胞密度,一般的转染试剂都会有专门的说明。如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,一般转染时贴壁细胞密度为50%-90%,但这个需要参考所选转染试剂的说明书,尽量在细胞最合适的生理状态下转染,以求最佳的转染效果。 (2)实验目的:不同的...
以下是导致转染效率低下的常见原因：1. 细胞状态不佳：转染前，细胞的生长状态和密度会影响转染效率。如果细胞生长不良或处于非对数生长期，转染效率可能会降低。因此，在转染前，应确保细胞处于良好的生长状态，并在适宜的密度下进行转染。2. 转染条件不佳：不同的细胞类型对转染条件有不同的要求。如果使用的转染试...
细胞转染的方式可以分为3类:化学法、物理法和生物介导方法。电转染作为具有代表性的物理方法转染,出现于1982年,作为通用、易用的细胞转染方法,具有其他方法无法比拟的优势,如重复性好、适用范围广等特点,在一定条件下兼得电转效率和细胞活率,尤其对目前对原代细胞和一般认...
原理：与脂质体转染类似，阳离子聚合物通过与核酸结合成复合物，利用细胞内吞进入细胞内。优点：在血清中稳定，细胞毒性较低，转染率高，且性价比高。缺点：同样需要对体系进行条件优化，且某些细胞体系可能不易转染。生物介导——病毒感染 原理：利用病毒侵染宿主细胞，从而将外源基因导入细胞内。优点：具有高转染率，...
转染前，可以制备不同浓度核酸来用于细胞检测的测试。例如，通过逐步制备 25-250 ng 的核酸浓度以针对实验的细胞群进行测试，从而筛选出合适的转染浓度从而提升转染效率。3.实时校正每个孔的细胞群，使每个孔内的细胞群尽量保持适宜的密度。当细胞大量聚集在一个孔中时，由于细胞接触面会受到抑制，容易造成低转染率。
1. 细胞状态在进行转染时，我们需要选择合适状态的细胞，一般原代细胞可以传1-2次后使用；尽量挑选迭代次数少的细胞，如果是冻存细胞，建议复苏1-2h后使用。细胞污染对细胞状态的影响很大，受到细菌、真菌或支原体污染的细胞都会导致转染效率降低、细胞死亡率增加。细菌污染细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(...
良好的细胞相容性能够确保转染试剂在不引起细胞明显应激反应的情况下，有效地将 DNA 递送至细胞内，提高转染的成功率。转染试剂与 DNA 的比例：合适的转染试剂与 DNA 比例对于获得最佳转染效率至关重要。比例过高可能导致转染试剂过量，引起细胞毒性增加或非特异性吸附，从而降低转染效率；比例过低则可能无法充分包裹和...
转染成功一般都会表达GFP蛋白,这个蛋白在流式上面可以用FL1通道检测到.转染成功的有表达,不成功的没表达,很容易算出细胞转染率. 分析总结。 转染成功一般都会表达gfp蛋白这个蛋白在流式上面可以用fl1通道检测到结果一 题目 如何用流式细胞术测定细胞转染率? 答案 转染成功一般都会表达GFP蛋白,这个蛋白在流式上面可以...