以下是导致转染效率低下的常见原因：1. 细胞状态不佳：转染前，细胞的生长状态和密度会影响转染效率。如果细胞生长不良或处于非对数生长期，转染效率可能会降低。因此，在转染前，应确保细胞处于良好的生长状态，并在适宜的密度下进行转染。2. 转染条件不佳：不同的细胞类型对转染条件有不同的要求。如果使用的转染试...
1) 优化质粒与BC转染试剂的比例,过高或者过低都会影响实验效果。 2) 细胞转染前需要保持状态良好,使用BC转染试剂试细胞密度需要达到70-90%,不同细胞的最佳转染密 度需要自行摸索。 3) 转染后培养时间不足,而被误认为转染效率偏低。细胞转染后至显著表达所需培养时间通常为24-48h。 4) 检查细胞是否支原...
1.细胞类型和状态 不同的细胞类型具有不同的转染效率。一些难转染的细胞，如神经元和肝细胞，通常需要更复杂的转染技术。此外，细胞的生长状态也会影响转染效率，处于对数生长期的细胞更容易接受外源基因。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在70-80%；如果是悬浮细胞的话，应该是6X105个/孔（24孔板），一般是转染前...
对于难转染的细胞,可以尝试采用特殊的转染方法或转染试剂,如电穿孔法、病毒载体介导的转染等。此外,还可以通过对细胞进行预处理(如使用细胞松弛素 B 等药物增加细胞膜的通透性)或共转染一些辅助因子(如阳离子聚合物等增强细胞对 RNA 的摄取能力)来提高转染效率。 细胞生长状...
转染后细胞存活率一直很低,在操作上有没有什么技巧能提高存活呢? 可以考虑在转染前提前更换一次预热的 37℃ 培养基。脂质体和 DNA/RNA 的转染混合物建议从培养皿一边到另一边逐滴滴下来。边滴边轻摇培养皿,确保分布均匀。关注下这种小细节,对转染细...
新型试剂(如X-tremeGENE)已兼容含血清转染,需严格参照说明书 Q4 电穿孔后细胞死亡率高 优化方向: 1、使用专用电转缓冲液(如Bio-Rad的GenePulser缓冲液) 2、降低电压(从推荐值的80%开始梯度测试) 3、采用"脉冲后恢复":电击后静置10分钟再移入培养箱 ...
1)核酸纯度不够,比如DNA/RNA不纯、质粒中含有内毒素、核酸不完整、核酸浓度过低均会导致转染效率低。建议使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。 2)要检测所用的无血清培养基与转染试剂的相容性,已知CD293, SFMII, VP-SFM 与转染试剂不相容。
某些细胞类型可能缺乏与转染试剂或 siRNA 特异性结合的受体，导致转染效率低下。此外，细胞的分化程度也会对转染效率产生影响。未分化的干细胞通常比分化成熟的细胞更难转染，因为干细胞具有更为复杂的自我保护机制和相对较低的代谢活性。（二）细胞生长状态 细胞的生长状态是影响 siRNA 转染效率的关键因素之一。处于对数...
细胞状态不好,会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6X105个/孔(24孔板),一般是转染前一天换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。转染的整个过程都不应该有抗生素。
转染效率低下会使siRNA无法高效地导入目标细胞，从而难以精准调控基因表达，亦会使siRNA治疗药物无法有效抑制致病基因。以下列举了五种siRNA难转染细胞的原因和应对策略。干细胞的Wnt、Notch 等信号通路可通过激活相关转录因子，上调防御基因表达，增强核酸酶活性等，识别并降解外来 siRNA，维持其干性。且其低分化状态下表面...