(4)转染当天，将细胞铺板。如果在转染前一天或更早时间铺板，转染效率可能下降，如果是简单细胞系的转染，可以直接在前一天晚上铺板，第二天来转染。转染时，细胞密度会影响转染效率，细胞密度保持在汇合率为70-90%(这个前提是转染24h，如果转染48h则需要汇合率为50-70%)，细胞的铺板和转染也可同时进行。2、细胞...
☆ 制备转染载体：选择适当的转染载体，如脂质体、病毒等，将目的基因包裹在转染载体中（这个步骤是载体构建，将目的基因插入到转染载体中，形成重组目的基因片段，并利用这种重组片段转染目标细胞，从而将目的基因导入细胞中）☆ 进行转染：按照生产商提供的标准操作流程，将转染载体导入受体细胞。☆ 确认转染效果：通过特...
siRNA转染步骤 1转染前一天接种细胞于6孔板,2ml无抗生素培养基每孔,第二天转染时细胞达到30-50%每孔。 2转染前半小时换Opti-MEM无血清培养基1.5ml。 3 A液:siRNA5ul(共100pmol)加入245ul Opti-MEM无血清培养基,轻轻混匀。(siRNA按照说明书稀释) 4 B液:脂质体使用前轻轻混匀,脂质体10ul加入245ul Opti-ME...
一般转染操作步骤一般转染操作步骤 1、稀释转染试剂 将6ul转染试剂FuGENE加到装有90-98ul预热到室温培养基的无菌聚丙乙烯管中,立即混匀,室温放置5min。注:勿将未稀释的转染试剂FuGENE碰到管壁,造成稀释不充分。 2、制备转染物 加2ug的质粒DNA至稀释的转染试剂中,立即混匀,室温放置15min。注:勿超过45min,否则...
(一)慢病毒转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。 2、第二天,用含有6μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液,37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培...
1.3转染试剂 -准备合适的转染试剂,如转染剂、离子可溶液等。不同类型的细胞需要使用不同的试剂。 二、转染步骤 转染步骤的具体操作根据不同的实验目的和细胞类型可能会有所不同。以下是一般的转染步骤: 2.1细胞处理 -将要转染的细胞洗涤并收集到离心管中。 -注意不要创建过高的转染细胞密度,以免影响转染效率。 2.2...
1)转染试剂的准备 A.将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。 B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。 2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,...
转染步骤是实现转染的关键步骤,包括细胞培养、转染试剂制备、转染试剂处理、细胞培养和分析。以下是转染步骤的详细描述。 第一步:细胞培养 在进行转染实验之前,首先需要培养并扩增所使用的细胞。细胞的培养基因常见的有DMEM、RPMI等,培养基中会添加适当的酵素抑制剂(如胰酶)和生长因子,以促进细胞的生长和增殖。 第二...
1、细胞培养：以293T细胞转染前一天（20-24小时）~0.4×10 6 个细胞（具体细胞数取决于细胞大小和细胞生长速度），接种到六孔板中，使其达到70-90%次日转染时汇合。2. 在接下来的转染步骤之前更换新鲜的细胞培养基。培养基的体积约为 2 ml。3. 轻轻混合 Lip脂质体转染试剂。4. 取无菌离心管，在 250 μl...
1、 慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。 4、继...