二、脂质体转染操作步骤 (1)细胞培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃ CO2培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。 (2) 转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液:用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。 B液:用不含血清培养基稀释2ul脂质...
如需FACS检测转染效率,可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选,可以在转染3-4天后开始加药。 (二)慢病毒转染悬浮细胞实验方法 1、在2×105/ml悬浮细胞中加入polybrene至6μg/ml和适量病毒,充分混匀。37℃孵育。或者150g室温离心4小时(选作,部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效...
将DNA,RNA,siRNA或寡核苷酸和转染试剂分别在不同的管中稀释→将两者混合形成混合物→将形成的混合物加入细胞中,脂质体的正电荷有助于帮助复合物粘附到细胞膜上→复合物经细胞内吞作用进入细胞→检测基因表达或沉默情况。 二、电穿孔法 1. 原理 利用电脉冲可逆地击穿细胞膜形成瞬时的膜上小孔,同时细胞膜上电势升高...
一、细胞转染的原理: 细胞转染主要通过三种方法实现:物理法、化学法和生物学法。 1.物理法:通过高压、电穿孔、微射流等方式,使细胞膜发生瞬时破裂,从而使DNA、RNA等外源分子进入细胞。常用的物理法有电穿孔法和基因枪法。 2.化学法:通过化学物质,如聚吡咯、脂质体等,使外源分子与细胞膜结合,从而实现转染。常用的...
细胞转染3-脂质体转染法的原理及步骤 #脂质体转染法的原理与步骤#, 视频播放量 1259、弹幕量 0、点赞数 20、投硬币枚数 4、收藏人数 38、转发人数 15, 视频作者 小恒学术, 作者简介 汉恒生物B站官方号,不要迷路哦~汉恒生物专注病毒包装,相关视频:细胞转染5-病毒转染法的
二、脂质体转染操作步骤 (1)细胞培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃CO2培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。 (2)转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液:用不含血清培养基稀释1ug质粒DNA。
病毒转染原理及步骤：一种高效基因转导方法 在细胞实验中，常规方法难以转染的细胞，通过病毒介导实验能显著提升基因转导效率，实现目的基因的高效瞬时表达。病毒转染包括三个主要步骤：构建载体、包装提纯病毒和感染靶细胞。以慢病毒为例，其载体以HIV-1为基础发展而来，具备感染分裂与非分裂细胞的能力，可...
siRNA转染原理 siRNA在细胞中降解mRNA的机制与miRNA类似（如上图），合成的siRNA通过胞吞进入细胞中，随后少量的 siRNA 能够发生溶酶体逃逸进入细胞质，进入细胞质后siRNA与 Dicer 及 TRBP 形成 RISC复合物，RISC复合物招募 AGO2，随后正义链被降解，siRNA 反义链与完全互补配对的 mRNA 序列结合，接着 AGO2 对mRNA ...
脂质体转染的操作步骤如下: 1.提取脂质体:首先,从脱脂牛奶或其它来源中提取脂质体。可以通过超声处理、离心等方法将脂质体分离出来。 2.混合目标基因与脂质体:将目标基因与脂质体混合,目标基因可以是质粒DNA、RNA等。将基因加入脂质体溶液中,进行充分混合。 3.孵育:将脂质体-基因混合物在室温下孵育一段时间,通常...